6_Důkazy-bílkovin - kopie
Níže je uveden pouze náhled materiálu. Kliknutím na tlačítko 'Stáhnout soubor' stáhnete kompletní formátovaný materiál ve formátu DOCX.
6. laboratorní práce
Důkazy bílkovin
Úkol č. 1: Důkaz dusíku v bílkovině
Pomůcky: zkumavka, odměrná zkumavka, pH papírek, kahan, kleště, kapátko
Chemikálie: bílek, NaOH
Postup: Do zkumavky dejte přibližně 2 ml roztoku vaječného bílku, přidejte 2 ml zředěného roztoku hydroxidu sodného. Zkumavku následně zahřívejte nad plamenem kahanu. Těsně nad zkumavkou kleštěmi přidržte navlhčený univerzální indikátorový papírek. Pozorujte a popište.
Pozorování:
Papírek měl modrou až modrozelenou barvu.
Papírek odpovídá pH 12 (zásadité pH).
Při tomto pH se uvolňuje amoniak (NH3)
Úkol č. 2: Biuretová reakce
Pomůcky: odměrná zkumavka, zkumavka, kapátko, zátka
Chemikálie: bílek, NaOH, CuSO4, mléko, výluh z luštěnin, výluh z brambor
Postup: Do zkumavky nalijte asi 1ml roztoku vaječného bílku. Přidejte 1 ml roztoku hydroxidu sodného a poté asi 5 kapek roztoku síranu měďnatého. Směs protřepte a pozorujte zbarvení. Stejnou reakci proveďte i s mlékem, s výluhem z luštěnin a výluhem z brambory.
Pozorování:
Bílkoviny obsahoval bílek, mléko, výluh z luštěnin.
Bílek je plnohodnotným zdrojem esenciálních aminokyselin, obsahuje: ovoalbumin, ovotransferin, ovomukoid, lysozym (globulin G1), globulin G2, G3, ovomucin, flavoprotein, ovomakroglobulin, ovoglykoprotein, ovoinhibitor, avidin, cystatin.
Mléko je také je plnohodnotným zdrojem esenciálních aminokyselin a obsahuje 2 hlavní typy proteinů – kaseiny (80%) a syrovátkové proteiny (20%). Kaseiny jsou zastoupeny čtyřmi typy: αS-kaseiny, β-kasein, γ-kasein, κ-kasein. Proteiny syrovátky jsou směsí velice různorodých bílkovin a peptidů. Největší podíl tvoří α-laktalbumin, sérový albumin, β-laktoglobulin, imunoglobuliny a různé polypeptidy.
Luštěniny nejsou tak hodnotným zdrojem bílkovin jako jsou výrobky živočišného původu. Obsahují globuliny, albuminy, prolaminy, gluteliny.Bílek obsahuje většinu bílkovin (u jednoho velkého vejce cca 3 gramy), je nízkokalorický a bez tuku. Většina tuku, cholesterolu, vitamínů i minerálních látek je obsažena ve žloutku.
Úkol č. 3: Xantoproteinová reakce
Pomůcky: zkumavka, odměrná zkumavka, kahan, kleště
Chemikálie: bílek, HNO3, NH3
Postup: Ve zkumavce mírně zahřejeme 2 ml roztoku vaječného bílku s asi 1 ml koncentrované kyseliny dusičné. Pozorujte zbarvení. Po vychladnutí přidejte asi 2 ml roztoku amoniaku. Pozorujte zbarvení.
Pozorování:
bílek + HNO3 →
Dochází k barevné změně – bílá → bílá se žlutou usazeninou na hladině.bílek + HNO3 + NH3 →
Při této reakci také dochází k barevné změně a to tak že se bíla barva se žlutou usazeninou mění na žlutou až oranžovou barvu se žlutými částečkami.
Závěr:
Bílkoviny dokazujeme charakteristickými barevnými reakcemi, které bílkoviny dávají prostřednictvím funkčních skupin aminokyselin s jinými látkami, nebo ve změně některých vlastností nejčastěji rozpustnosti.
Úkol č.1: Tepelným rozkladem bílkovin, které jsou složeny z aminokyselin, se uvolňuje část dusíku vázaného v aminokyselinách (skupina –NH2) ve formě amoniaku NH3. Amoniak je rozpustný ve vodě (tvoří amonné kationty a hydroxidové anionty), ale velmi málo v zásaditých roztocích. Proto uniká jako plyn, který lze dokázat pomocí univerzálního indikátorového papírku, který zmodrá (pH12).
Úkol č.2: Biuretová reakce je reakce při níž se dokazuje bílkovina pomocí směsi roztoků hydroxidu sodného NaOH a síranu měďnatého CuSO4. Bílkovina se při důkazu zbarví modrofialově. Biuretovou reakcí dokážeme peptidové vazby. Ty tvoří v alkalickém prostředí se solemi mědi charakteristicky barevný komplex-biuret. Název je odvozen od kondenzačního produktu dvou molekul močoviny – biuretu. Peptidovou vazbou se navzájem váží aminokyseliny. Náš výsledek však barevně vyšel jinak (zelený), důvodem může být například použití KOH místo NaOH, nebo špatný poměr množství použitých látek.
Úkol č.3: Působením koncentrované kyseliny dusičné za tepla dojde k nitraci benzenového jádra aminokyselin fenylalaninu a tyrosinu a indolové skupiny tryptofanu. Vznikající nitrosloučeniny jsou žlutě až oranžově zbarvené. Aromatické aminokyseliny jsou v bílkovinách běžně zastoupeny, takže touto reakcí je možné dokázat většinu bílkovin. Název reakce je odvozen od řeckého slova „xanthos“ – žlutý.