Předmět Metody molekulární biologie - cvičení (Bi6405)
Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu Bi6405 - Metody molekulární biologie - cvičení, Přírodovědecká fakulta, Masarykova univerzita (MU).
Top 10 materiálů tohoto předmětu
Materiály tohoto předmětu
| Materiál | Typ | Datum | Počet stažení |
|---|
Další informace
Cíl
Studenti v rámci tohoto kurzu získávají zkušenosti s manipulacemi s molekulami DNA in vitro, které jsou nutné pro přípravu jejichrekombinantích variant. Smyslem kurzu je výuka izolace čisté akoncentrované plazmidové DNA z bakterií, jejich enzymatickáfragmentace, úpravy konců a ligace s jinými molekulami. Navíc sistudenti osvojují elektroforetické techniky (DNA, proteiny), způsoby eluce DNA z gelu, immunoblotting, metody přenosu plazmidové DNA do eukaryotických buněk.Po absolvování tohoto kurzu budou studenti schopni provádět výše zmíněné postupy samostatně a správně je aplikovat při studiu různých biologických procesů.
Osnova
1. Inokulace a kultivace bakteriálních buněk, nesoucích příslušnéplazmidy.2. Izolace plazmidové DNA z bakteriálních buněk na kolonách Qiagen.3. Restrikční štěpení plazmidové DNA a úprava 5 přečnívajících koncůDNA polymerázou.4. Agarózová elektroforéza molekul DNA.5. Eluce požadovaných fragmentů DNA z gelu a jejich přečištění6. Spojení příslušných fragmentů DNA ligací.7. Transformace kompetentních bakteriálních buněk.8. Selekce transformantů.9. Kontrola přítomnosti rekombinantních molekul v tranformantech(minipreparace plazmidu, restrikční analýza, elektroforéza).10. Transfekce rekombinantních plazmidů do savčích buněk.11. Příprava buněčného lyzátu, elektroforéza proteinů a immunobloting.
Literatura
GREEN, Michael R. a Joseph SAMBROOK. Molecular cloning :a laboratory manual. 4th ed. New York [N.Y.]: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012. xxxiii, s. ISBN 9781936113422. info
Požadavky
( Ex_3065 Molekulární biologie || Imp_9115 Molekulární biologie || B3120 Molekulární biologie || B4030 Molekulární biologie || B5740 Molekulární biologie || B6130 Molekulární biologie || B7940 Molekulární biologie || B4020 Molekulární biologie || Bi4020 Molekulární biologie || Bi4035 Molekulární biologie - lab.cv. ) && NOW ( Bi6400 Metody molekulární biologie ) && ! B6405 Metody molek. biologie - cvič. Kurz vyžaduje znalost základních praktických návyků z oblastimikrobiologie, biochemie a molekulární biologie, jako např.přípravu roztoků a kultivačních půd, sterilní manipulace s tekutinami,inokulace, centrifugace, atd.
Garant
prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc.
Vyučující
doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D.RNDr. Jakub Neradil, Ph.D.Mgr. Lucia Knopfová, Ph.D.prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc.