Předmět Praktikum z genového inženýrství (Bi8313)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu Bi8313 - Praktikum z genového inženýrství, Přírodovědecká fakulta, Masarykova univerzita (MU).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Cíl

Cílem praktického kurzu je zvládnutí metod pro manipulaci s DNA (restrikční endonukleázy, klonování DNA, příprava molekulárních sond, modifikace DNA in vitro prostřednictvím polymerázové řetězové reakce, klonování produktů PCR, přenosy DNA do buněk, selekce klonů s rekombinantní DNA a sekvencování klonů).

Osnova

1. Izolace restrikčních endonukleáz Sau3AI a Sau96. Ověření aktivity restriktáz. Optimalizace štěpení.2. Modifikace konců DNA prostřednictvím PCR. Návrh sekvencí primerů s 5'-konci pro modifikaci konců amplikonu (vložení restrikčního místa). Provedení PCR. Purifikace produktů pomocí komerčního kitu.3. Klonování ve vektorech řady pUC. Defosforylace konců vektoru alkalickou fosfatázou, ligace vektorové a cizorodé DNA T4 DNA ligázou, transformace kompetentních buněk, identifikace rekombinantů na ampicilinových plotnách s IPTG a X-gal, restrikční analýza klonů.4. DNA hybridizace. Neradioaktivní značení DNA digoxigeninem (příprava genově specifické sondy), příprava roztoků pro hybridizaci, Southernův přenos DNA na hybridizační membránu, hybridizace DNA se značenou sondou, imunologická detekce.5. Sekvencování DNA. Příprava denaturačního polyakrylamidového gelu pro sekvencování, zpracování sekvencí DNA a proteinů na PC.

Literatura

Klonování genů a analýza DNA :úvod. Edited by T. A. Brown, Translated by Martin Fellner. 1. české vyd. V Olomouci: Univerzita Palackého, 2007. xviii, 389. ISBN 978-80-244-1719-6. infoŠMARDA, Jan , Jiří DOŠKAŘ , Roman PANTŮČEK , Vladislava RŮŽIČKOVÁ a Jana KOPTÍKOVÁ . Metody molekulární biologie. 1. vyd. Brno: Masarykova univerzita, 2005. 194 s. 1. vydání. ISBN 80-210-3841-1. infoSAMBROOK, J., E.F. FRITSCH a T. MANIATIS. Molecular Cloning. A laboratory Manual. Second Edition. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. ISBN 0-87969-309-6. info

Požadavky

! B6492 Prakt. z mol. biol. 2 && ( Ex_2979 Metody molekulární biologie || Ex_2980 Metody molekulární genetiky || B6390 Metody molekulární genetiky || B6400 Metody molekulární biologie || Bi6400 Metody molekulární biologie ) && ( Bi6405 Metody molek. biologie - cvič. || B6405 Metody molek. biologie - cvič. ) && NOW ( Bi8090 Genové inženýrství ) && ! Bi5491 Prakt. z mol. diagnostiky Znalosti základních metod molekulární biologie (izolace DNA, enzymatické úpravy DNA, gelová elektroforéza)

Garant

doc. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D.

Vyučující

doc. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D.Mgr. Ivana Mašlaňová, Ph.D.Mgr. Martin Benešík