Předmět Bioanalytické metody (KBI / N031)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu KBI / N031 - Bioanalytické metody, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Jana Evangelisty Purkyně v Ústí nad Labem (UJEP).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Obsah

I. Základy separačních metod* Centrifugační metody v bioanalytice (diferenciální, zonální, izopyknická)* Chromatografické metody v bioanalytice (afinitní chromatografie, IEC, RP-LC, GPC)* Hmotnostní spektroskopie biomolekul (MALDI-TOF/MS, ESI-MS)* Principy elektroforetických metod - elektroforéza proteinů a DNA, isoelektrická fokusace, kapilární elektroforézaII. Imunochemické a enzymatické metody* Základy enzymologie, stanovení aktivit volných a imobilizovaných enzymů, enzymové metody stanovení analytů, metody stanovení substrátů, aktivátorů a inhibitorů enzymových reakcí.* Protilátky. Struktura a funkce antigenů. Příprava monoklonálních, polyklonálních a rekombinantních protilátek, charakterizace a značení. Interakce protilátka - antigen, afinita, specifita, křížové reakce.* Imunochemická stanovení - precipitační a neprecipitační imunochemické metody, enzymová imunoanalýza (ELISA), fluorescenční imunoanalýza, radioimunoanalýza (RIA), Western blotting a dot blotting, FACS - fluorescence activated cell sortingIII. Optické detekční metody* Spektroskopické a fluorescenční metody studia biomolekul (UV-VIS spektroskopie, spektroskopie v infračervené oblasti, fluorescenční spektroskopie), stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů - Biuretová metoda, Lowryho metoda, BCA metoda, Metoda Bradfordové, přímá spektrofotometrická stanovení, fluorescenční stanovení.IV. Základy optické mikroskopie* Význam optické mikroskopie v biologickém a biomedicinském výzkumu - teorie světla, lom, odraz, difrakce, inteference a polarizace mikroskop a jeho součásti, vytváření obrazu v mikroskopu, Köhlerovo osvětlení, optické vady v mikroskopii, objektivy a jejich dělení, metody světlého a tmavého pole, fázový kontrast, interferenční kontrast a polarizace.* Fluorescenční mikroskopie - fluorescence a autofluorescence, fluorescenční mikroskop a jeho součásti, detektory pro fluorescenční mikroskopii,* Konfokální laserová skenovací mikroskopie - konfokální mikroskop, jeho princip a součásti, zdroje pro konfokální mikroskopii, děliče svazků, konfokální apertura, detektory, skenery? Pokročilé techniky optické mikroskopie - FRAP, FRET, vícefotonová mikroskopie, elektrofyziologie, Second Harmonic Generation, Third Harmonic Generation, FLIM, FCS, FLIM-FRET, FCCS, RICS, CARS.* Superrozlišovací techniky optické mikroskopie - mikroskopické techniky za difrakčním limitem ve widefield a konfokální mikroskopii - např. 4PI a SIM, dále nanometrové techniky - STED, PALM, STORM, apod.* Dlouhodobé sledování živých buněk - klimaboxy a nároky na ně, použité materiály, snímání, autofokusovací metody - hardwarový a softwarový autofokus, dekonvoluce, sledování pohybu vzorku, základní zpracování obrazu - komerční a freeware software* Metody přípravy mikroskopických vzorků pro optickou mikroskopii - kultivační metody, fluorescenční barveníV. Základy molekulárně-biologických metod* Základy molekulárně-biologických metod (izolace a přečištění DNA, štěpení a ligace DNA, separace DNA, sekvenace DNA a proteinů, syntéza oligonukleotidů a peptidů)* Základy genového inženýrství (rekombinantní DNA, klonování DNA, cDNA knihovny, klonovací a expresní vektory, GMO)Praktická část kurzu* Separační techniky (dialýza, filtrace, gelová chromatografie, SDS-PAGE elektroforéza, HPLC-GPC)* Základy optických detekčních metod (spektroskopie v UV-VIS a infračervené oblasti, spektrofluorimetrie, stanovení proteinů a nukleových kyselin)* Základy molekulárně-biologických metod (restrikční analýza DNA, izolace a přečištění DNA* Mikroskopické techniky (příprava preparátů pro světelnou mikroskopii, práce s fluorescenčním mikroskopem, konfokálním laserovým skenovacím mikroskopem, s multifotonovým mikroskopem, SHG a FLIM

Literatura

K. Štulík a kol. Analytické separační metody. Skripta PřF UK. Karolinum Praha 2005. B. Králová, L. Fukal, P. Rauch, T. Ruml. Bioanalytické metody, Vydavatelství VŠCHT PRAHA, 2001. Vodrážka, Z. Biotechnologie. Academia, Praha. 1992. Vondrejs V. Genové inženýrství I a II. Karolinum, Praha. 2001. Přednáškové materiály formou prezentací, vyhotovených vyučujícím. I. Němcová a kol. Spektrometrické analytické metody I. Karolinum Praha 2004. Šifner, F. Vybrané kapitoly z biotechnologií, UK Praha, 1998. A. Manz, N. Pamme & D. Iossifidis. Bioanalytical Chemistry, Imperial College Press, 2007. S.R. Mikkelsen, E. Cortón:. Bioanalytical Chemistry, Wiley Interscience, 2004, ISBN: 978-0-471-54447-0. J. Cooper and T. Cass. Biosensors - a practical approach, Oxford University Press, 2004. Ruml T. Laboratoře z genového inženýrství. VŠCHT. 1997. Curell B.F. et al. Techniques for Engineering Genes. University of Greenwich, London 1994. Rozsypal S. a kol. Úvod do molekulární biologie I.-III. Academia, Praha 2000.

Garant

Mgr. Jan Malý, Ph.D.

Vyučující

Mgr. Jan Malý, Ph.D.Dr. Dominika Wróbel, Ph.D.Dr. Dominika Wróbel, Ph.D.