Předmět Bioanalytické metody (KBI / P320)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu KBI / P320 - Bioanalytické metody, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Jana Evangelisty Purkyně v Ústí nad Labem (UJEP).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Obsah

I. Základy separačních metod* Centrifugační metody v bioanalytice (diferenciální, zonální, izopyknická)* Chromatografické metody v bioanalytice (afinitní chromatografie, IEC, RP-LC, GPC)* Hmotnostní spektroskopie biomolekul (MALDI-TOF/MS, ESI-MS)* Principy elektroforetických metod - elektroforéza proteinů a DNA, isoelektrická fokusace, kapilární elektroforézaII. Imunochemické a enzymatické metody* Základy enzymologie, stanovení aktivit volných a imobilizovaných enzymů, enzymové metody stanovení analytů, metody stanovení substrátů, aktivátorů a inhibitorů enzymových reakcí.* Protilátky. Struktura a funkce antigenů. Příprava monoklonálních, polyklonálních a rekombinantních protilátek, charakterizace a značení. Interakce protilátka - antigen, afinita, specifita, křížové reakce.* Imunochemická stanovení - precipitační a neprecipitační imunochemické metody, enzymová imunoanalýza (ELISA), fluorescenční imunoanalýza, radioimunoanalýza (RIA), Western blotting a dot blotting, FACS - fluorescence activated cell sortingIII. Optické detekční metody* Spektroskopické a fluorescenční metody studia biomolekul (UV-VIS spektroskopie, spektroskopie v infračervené oblasti, fluorescenční spektroskopie), stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů - Biuretová metoda, Lowryho metoda, BCA metoda, Metoda Bradfordové, přímá spektrofotometrická stanovení, fluorescenční stanovení.IV. Základy optické mikroskopie* Význam optické mikroskopie v biologickém a biomedicinském výzkumu - teorie světla, lom, odraz, difrakce, inteference a polarizace mikroskop a jeho součásti, vytváření obrazu v mikroskopu, Köhlerovo osvětlení, optické vady v mikroskopii, objektivy a jejich dělení, metody světlého a tmavého pole, fázový kontrast, interferenční kontrast a polarizace.* Fluorescenční mikroskopie - fluorescence a autofluorescence, fluorescenční mikroskop a jeho součásti, detektory pro fluorescenční mikroskopii,* Konfokální laserová skenovací mikroskopie - konfokální mikroskop, jeho princip a součásti, zdroje pro konfokální mikroskopii, děliče svazků, konfokální apertura, detektory, skenery? Pokročilé techniky optické mikroskopie - FRAP, FRET, vícefotonová mikroskopie, elektrofyziologie, Second Harmonic Generation, Third Harmonic Generation, FLIM, FCS, FLIM-FRET, FCCS, RICS, CARS.* Superrozlišovací techniky optické mikroskopie - mikroskopické techniky za difrakčním limitem ve widefield a konfokální mikroskopii - např. 4PI a SIM, dále nanometrové techniky - STED, PALM, STORM, apod.* Dlouhodobé sledování živých buněk - klimaboxy a nároky na ně, použité materiály, snímání, autofokusovací metody - hardwarový a softwarový autofokus, dekonvoluce, sledování pohybu vzorku, základní zpracování obrazu - komerční a freeware software* Metody přípravy mikroskopických vzorků pro optickou mikroskopii - kultivační metody, fluorescenční barveníV. Základy molekulárně-biologických metod* Základy molekulárně-biologických metod (izolace a přečištění DNA, štěpení a ligace DNA, separace DNA, sekvenace DNA a proteinů, syntéza oligonukleotidů a peptidů)* Základy genového inženýrství (rekombinantní DNA, klonování DNA, cDNA knihovny, klonovací a expresní vektory, GMO)Praktická část kurzu* Separační techniky (dialýza, filtrace, gelová chromatografie, SDS-PAGE elektroforéza, HPLC-GPC)* Základy optických detekčních metod (spektroskopie v UV-VIS a infračervené oblasti, spektrofluorimetrie, stanovení proteinů a nukleových kyselin)* Základy molekulárně-biologických metod (restrikční analýza DNA, izolace a přečištění DNA* Mikroskopické techniky (příprava preparátů pro světelnou mikroskopii, práce s fluorescenčním mikroskopem, konfokálním laserovým skenovacím mikroskopem, s multifotonovým mikroskopem, SHG a FLIM

Požadavky

účast na cvičení, vedení protokolů, zkouška ústní

Garant

Mgr. Jan Malý, Ph.D.

Vyučující

Mgr. Jan Malý, Ph.D.Dr. Dominika Wróbel, Ph.D.Dr. Dominika Wróbel, Ph.D.