Předmět Izolace mikrosatelitových primerů pro biosystematické a populačně-ekologické studie (MB120C115)
Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu MB120C115 - Izolace mikrosatelitových primerů pro biosystematické a populačně-ekologické studie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze (UK).
Top 10 materiálů tohoto předmětu
Materiály tohoto předmětu
| Materiál | Typ | Datum | Počet stažení |
|---|
Další informace
Sylabus
1. denbezpečnostní předpisy, zásady práce v laboratoři, seznámení s vybavením laboratořeúvod do problematiky izolace mikrosatelitových primerů, doporučená literaturarestrikce celkové DNAkontrola produktu na agarosovém gelu, práce s dokumentačním systémem Kodak Gel Logic 100ligace adaptorů2. denprincip selektivní hybridizace a obohacování prostřednictvím streptavidinových kuliček, demonstrační videohybridizace prostřednictvím biotinylovaných mikrosatelitových oligonukleotidůvymytí fragmentů bez repetice za pomoci magnetických streptavidinových kuličekpřečištění fragmentů prostřednictvím QIA gen Kituměření koncentrace, ředění3. denpříprava LB média, příprava agarových plotenprincip hybridizace kompetentních buněkinserce produktu do vektoru (GENE Jet Kit, Fermentas)transformace vektoru do kompetentních buněk (XL-1 Blue) tepelným šokemvýsev produktu na selektivní agarové plotny, inkubace přes noc4. denkontrola úspěšnosti transformace, případné přeočkování příliš hustých koloniíPCR z pozitivních kolonií kontrola na gelu5. denPCR z přeočkovaných pozitivních kolonií, kontrola na gelu (pouze v případě příliš hustých kolonií po prvním očkování)sekvenační reakce pomocí kitu ABI PRISM BigDye Terminator v3.1precipitace produktusekvenace na sekvenátoru ABI 3100 Avant na biologické sekci PřF UK6. den - 7. denvyhodnocování sekvenačních dat ze sekvenátorunavržení primerů podle sekvencí přilehlých k mikrosatelitové oblastiobjednání primerů (SIGMA)přerušení praktika na několik dní až do dodání primerů (zpravidla 3-5 dnů)8. den - 10. dentestování variability jednotlivých mikrosatelitůo optimalizace PCR s nadesignovanými primeryo PCR většího počtu vzorků, kontrola na agarosovém geluo precipitace produktuo fragmentační analýzao hodnocení variability mikrosatelitů
Požadavky
zápočet - aktivní účast na praktiku
Garant
Mgr. Eva Dušková
Vyučující
Mgr. Eva Dušková