Předmět Praktikum z molekulární genetiky (MB140C39)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu MB140C39 - Praktikum z molekulární genetiky, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze (UK).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Sylabus

Úlohy řešené v průběhu praktik: 1. Konstrukce expresního vektoru, produkce a purifikace GFP; jedná se o jednu ze dvou nosných úloh praktika v jejímž průběhu si studenti osvojí základní postupy molekulárně biologické praxe jako je PCR, restrikční štěpení, agarózová elektroforéza, izolace DNA z gelu, ligace, transformace bakterií, neradioaktivní hybridizace, exprese rekombinantních proteinů v bakteriálním systému a jejich následná purifikace pomocí afinitní chromatografie, proteinová elektroforéza a "western blot".2. Izolace a restrikční mapování neznámého plasmidu; druhá nosná úloha celého praktika, opět obsahuje množství běžně používaných molekulárních postupů, např. restrikční štěpení, agarózová elektroforéza, kapilární přenos DNA, příprava radioaktivní sondy a radioaktivní hybridizace. 3. Práce s reportérovými geny u kvasinek; v průběhu této úlohy se posluchači naučí práci s kvasinkovými kulturami (transformace kvasinek, testování auxotrofií), včetně stanovení normalizované aktivity luciferázy v kvasinkových lyzátech. 4. Analýza nukleových kyselin; úloha zahrnující několik různých postupů využívaných při izolaci DNA a RNA z kvasinek (izolace chromozomální a plasmidové DNA) a rostlin (izolace celkové RNA včetně následné reverzní transkripce).5. Forenzní analýza DNA; izolace lidské DNA ze bukálních výtěrů, určení krevních skupin a STR profilů účastníků praktika včetně následného statistické hodnocení.6. RNA interference pomocí shRNA a lentivirové transdukce.7. PCR ; v této úloze je testována "robustnost" PCR v závislosti na koncentraci vstupních složek. 8. Teoretické úlohy; průběžně v průběhu praktika (bioinformatika, práce s databázemi, navrhování primerů, vyhledávání genů, výukové molekulárně biologické programy, dvouhybridivé systémy apod.).Studijni literatura:V. Vondrejs; Genové inženýrství I, II a III, KarolinumT. A. Brown - Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction; Blackwell Publishing IncorporatedJ. Sambrook, D. Russell - Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Third Edition), CSHL Press

Literatura

Sambrook, J., Fritsch, E.F., Maniatis, T., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory PressSambrook J., Russell D.W., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition, Cold Spring Harbor Laboratory PressVondrejs V. (1997, 2001, 2003), Genové inženýrství I-III, KarolinumBrown T.A. (2006) Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction; Blackwell Publishing Incorporated

Požadavky

Podmínky pro udělení zápočtu jsou následující:1/ aktivní účast na praktiku (je povolena jedna půldenní absence během celého turnusového praktika)2/ výstupní test, který se skládá z cca 10-15 otázek generovaných z látky přednášené na praktiku. Časovým limit výstupního testu je 120 minut, minimální hranicí nutnou ke klasifikaci testu jako splněného je 65% správných odpovědí.3/ vypracování protokolů a to včetně teoretických úloh apod., a jejich následné uznání vedoucím praktika.

Garant

Mgr. Václav Vopálenský, Ph.D.