Předmět Praktikum z virologie (MB140C70)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu MB140C70 - Praktikum z virologie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze (UK).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Sylabus

Praktický kurz z virologie probíhá jako dvoutýdenní turnusové cvičení. Kurz je určen pro studenty s diplomním zaměřením virologie a molekulární biologie. Kapacita jednoho kurzu je maximálně 18 posluchačů a je limitována náročností prováděných metod. V průběhu kurzu se posluchači naučí pracovat s infekčním biologickým materiálem v laboratoři s úrovní technického zabezpečení 2 (ÚTZ-2) a osvojí si návyky nutné pro práci s potenciálními lidskými patogeny. V rámci kurzu probíhají 3 modelové praktické úlohy, které jsou koncipovány tak, aby metodicky reprezentovaly problémy se kterými se posluchač může setkat v základním výzkumu i biomedicínckých oborech. Je dbáno o to, aby se prováděné metodiky příliš nepřekrývaly s náplní praktických kurzů z molekulární biologie a genetiky, ale aby se staly nadstavbou těchto kurzů. Součástí kurzů je také série krátkých přednášek o teoretických základech použitých metod a virových expresních systémech.Úloha č.1: IDENTIFIKACE VIRU V BIOLOGICKÉM VZORKU. Postup: práce s tkáňovými kulturami a osvojení návyků při práci s infekčním materiálem v laboratoři ÚTZ-2, průkaz přítomnosti známého/neznámeho viru (BKV, SV40, MCV) a stanovení produktivní vs. abortivní infekce (virová transformace); analýza na úrovni DNA a proteinů. Metody práce: izolace DNA, srovnání metod prosté PCR a "rolling-circle amplification" (RCA) při diagnostice infekcí; ELISAÚloha č.2: KVANTIFIKACE VIRU V ZÁSOBNÍM INOKULU MYŠÍHO POLYOMAVIRU. Postup a metody: Srovnání několika metod kvantifikace viru, plaková titrace, určení titru pomocí imunofluorescence, metoda konečného ředění, pozorování projevů infekce. Úloha č.3: PŘÍPRAVA A PURIFIKACE VLPs (VIRUS-LIKE PARTICLES) a INTERFERENČNÍ ANALÝZA INFEKCE. Postup: Příprava VLPs pomocí bakulovirového expresního systému a analýza infekce myším polyomavirem v přítomnosti izolovaných VLPs (zjištění zda dochází ke kompetitivní inhibici infekce). Metody: izolace a purifikace VLPs (ultracentrifugací v CsCl gradientu), imunodotblot nebo Western blot, kvantifikace VLPs hemaglutinací (popř. Stanovení množství proteinů). Kontrastování vzorku metodou negativního barvení, elektronová mikroskopie, imunofluorescence. Součásti přípravy na řešení úloh jsou literární rešerše připravované studenty. Výsledky úloh budou počítačově zpracovány a přehledně shrnuty do formy vědeckého článku nebo posteru. Další informace a výukové materiály získají studenti na moodle http://dl.cuni.cz/.Podmínky splnění předmětu:Udělení zápočtu je podmíněno aktivní účastí na praktiku (jsou povolené 4 hodiny řádně omluvené absence během celého turnusového praktika). Pro zíkání zápočtu je dále třeba absolvovat výstupní test se 75% úspěšností (9 otevřených testových otázek), odevzdat řešení teoretických problémových úloh a protokol k praktickým úlohám ve formě vědeckého článku v předepsaném termínu a formě (zadání je uvedeno v příručce na http://dl.cuni.cz/) Tyto dokumenty lze vrátit po konzultaci k přepracování pouze jednou, při opakovaných nedostatcích nebude zápočet udělen.

Literatura

Literatura:David R. OďReilly, Lois K. Miller, Verne A. Luckov: Baculovirus Epression Vectors: a laboratory manual, W.H. Freeman and Company, New York 1992.Bernard N. Fields, David M. Knipe, Peter M. Howley: Fundamental Virology 3rd ed, Lippincott-Raven, Philadelphia 1996.Martin Krčmář, Beda Břicháček: Molekulárně biologické metody ve virologické diagnostice, IDVPZ Brno, 1993.

Požadavky

Podmínky splnění předmětu:Udělení zápočtu je podmíněno aktivní účastí na praktiku (jsou povolené 4 hodiny řádně omluvené absence během celého turnusového praktika). Pro získání zápočtu je dále třeba absolvovat výstupní test se 75% úspěšností (9 otevřených testových otázek), odevzdat řešení teoretických problémových úloh a protokol k praktickým úlohám ve formě vědeckého článku v předepsaném termínu a formě (zadání je uvedeno v příručce na http://dl.cuni.cz/) Tyto dokumenty lze vrátit po konzultaci k přepracování pouze jednou, při opakovaných nedostatcích nebude zápočet udělen.

Garant

RNDr. Hana Španielová, Ph.D.

Vyučující

RNDr. Lenka Horníková, Ph.D.RNDr. Hana Španielová, Ph.D.