Předmět Fluorescenční spektroskopie v biologii (MB140C75)
Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu MB140C75 - Fluorescenční spektroskopie v biologii, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze (UK).
Top 10 materiálů tohoto předmětu
Materiály tohoto předmětu
| Materiál | Typ | Datum | Počet stažení |
|---|
Další informace
Cíl
Cílem praktického cvičení je seznámit s fluorescencí jako všestrannou metodou použitelnou v biologii. Studenti při samostatné práci s fluorometrem zvládnou základní techniky včetně vyhodnocení výsledků a návrhu experimentů.
Sylabus
1. Teoretická část - přednáška:Úvod do fluorescenční spektroskopie. Jablonského diagram, emisní spektra a jejich změny, doba života excitovaného stavu, fluorescenční sondy a informace o nich, zhášení fluorescence a jeho typy, FRET, polarizovaná fluorescence, časově rozlišená fluorescence, spektrofluorimetry. 2. Praktická část - úlohy:a) Kalibrace fluorometru, excitační a emisní spektra používaných sond, intenzita, spektra a polarita prostředí, vliv pH na spektra. Artefakty (vnitřní filtr, pozadí, korekce spekter, Ramanův rozptyl). Navržení optimálních podmínek pro pokus "v kyvetě" a pro pokus s konfokálním mikroskopu.b) Trp a Tyr jako přirozené fluorofory. Spektra Trp v proteinech, jejich změny při oligomerizaci a při zabudování do biologické membrány.c) Polarizovaná fluorescence. Anizotropie fluorescence, membránová fluidita, teplota a fázové přechody v syntetických lipidech a biologických membránách, fluidizace biologických membrán (artefakty: rozptyl a polarizace, korekce dat u složitějších biologických vzorků).d) Měření časově rozlišené fluorescence: stanovení koncentrace iontů Cl- (zhášení).e) Vyhodnocení dat z konfokálního mikroskopu: výpočet GP Laurdanu (fluidita buněčných mebrán); poměrové měření fluorescence a změny koncentrace vápníku v buňkách. Používaný software: tabulkový procesor MS Excel nebo Gnumeric (GNU), Fityk (analýza spekter, histogramů, kinetik, nelineární regrese; http://fityk.nieto.pl/), WCIF ImageJ (analýza mikroskopického obrazu; http://fiji.sc/Fiji, http://imagej.net/Welcome).
Literatura
Joseph R. Lakowicz (2006): Principles of Fluorescence Spectroscopy , 3rd edition, Springer
Požadavky
K zápočtu je nutná přítomnost na úvodní přednášce, absolvování vstupního testu na e-learningové platformě Moodle http://dl2.cuni.cz/course/view.php?id=242 s minimálně 60% úspěšností.Dále je nutné odevzdat kompletní protokoly v excelovském souboru. Excelovský soubor musí být uploadován jako úkol v Moodle k datu, které je určeno vždy na konci cvičení.
Garant
RNDr. Radovan Fišer, Ph.D.
Vyučující
RNDr. Radovan Fišer, Ph.D.Mgr. Petra Matyska Lišková