Předmět Rekomb. GFP technologie a jejich využití (CRH / GFPT)
Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu CRH / GFPT - Rekomb. GFP technologie a jejich využití, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Palackého v Olomouci (UP).
Top 10 materiálů tohoto předmětu
Materiály tohoto předmětu
| Materiál | Typ | Datum | Počet stažení |
|---|
Další informace
Obsah
1. Historie. Objev fluorescenčních proteinů, jejich přirozené zdroje a biologické funkce. Principy bioluminiscence.2. Fyzikální, chemické a molekulární vlastnosti fluorescenčních proteinů. Třídimenzionální struktura a variace ve struktuře jako základ funkční variability.3. Zelený fluorescenční protein z Aequorea victoria (GFP) a jeho mutované alelické formy. Změny v spektrálních vlastnostech, fotostabilitě a fototoxicitě. Typy a vlastnosti přirozeně se vyskytující fluorescenční proteiny z jiných druhů.4. Spektrální vlastnosti fluorescenčních proteinů a jejich využití v buněčné biologii. Maturace fluorochromů a exprese excitačních a emisních vlastností. Problém dimerizace a oligomerizace, cílený vývoj monomerických forem.5. Molekulární biologie rekombinantních GFP technologií. Klonování, vektory, konstrukce plazmidů pro transfer genů. Tvorba fúzních produktů fluorescenčních proteinů. Metody propagace, izolace a transformace. Sekvence chimerických genů.6. Pasivní aplikace GFP technologií. Funkční fúze GFP a rekombinantní exprese. Buněčné markery, referenční geny, fúzní proteiny.7. Spektrum využití GFP technologií u různých druhů organizmů. Aplikace ve funkčních buněčných studiích.8. Specifické tagování fluorescenčních proteinů pro dynamické studium buněčných organel. Sledování dynamiky organel a GFP-fúzních proteinů, subcelulární lokalizace, vícebarevné snímání a kolokalizace.9. Využití technologie fluorescenčních proteinů u rostlin: příprava konstruktů, transformace, exprese, detekce. Varianty fluorescenčních proteinů pro multispektrální detekci v živých buňkách. Exprese netoxických markerů neinvazní metodou v reálném čase.10. Praktické aplikace studia živých buněk v reálném čase: Kvantitativní analýzy proteinů, jejich interakcí a dynamické redistribuce v buňkách metodami FRET, FLIM, FRAP, FLIP. Vizualizace molekulárních interakcí v živých buňkách bimolekulární fluorescenční komplementací. Princip, možnosti využití a aplikace. Fluorescenční korelační spektroskopie.11. Optické varianty fluorescenčních proteinů a jejich aplikace. Fotoaktivace, fotokonverze, fotoindukce, časově?spektrální aktivace.12. Geneticky kódované fluorescenční molekulární biosenzory: Aktivní aplikace GFP technologií na senzitivní detekci fyziologických a metabolických buněčných změn.
Získané způsobilosti
Teoretické vědomosti o principu moderních rekombinantních GFP technologií, jejich použití a o praktických aplikacích v rostlinné biologii.
Literatura
Berg RH, Beachy RN. Fluorescent protein applications in plants. Methods Cell Biol 85: 153-77, 2008. Tsien RY. The green fluorescent protein. Annu Rev Biochem 67: 509?44, 1998. Sullivan KF . Fluorescent Proteins. Methods in Cell Biology ? Svazek 85, Academic Press, 2008. Chudakov DM, Matz MV, Lukyanov S, Lukyanov KA. Fluorescent proteins and their applications in imaging living cells and tissues. Physiol Rev 90: 1103?1163 , 2010.
Požadavky
Účast a úspěšné absolvování písemné zkoušky formou testu s minimálním počtem 75% získaných bodů
Garant
doc. Mgr. Miroslav Ovečka, Ph.D.
Vyučující
doc. Mgr. Miroslav Ovečka, Ph.D.