Předmět Tranzientní a stabilní transfor. rostlin (CRH / TR)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu CRH / TR - Tranzientní a stabilní transfor. rostlin, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Palackého v Olomouci (UP).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Obsah

Semináře:1) Vymezení základních pojmů, historie transformací a transgenoze rostlin, bakterie Agrobacterium tumefaciens - Ti-plazmidRozdělení vědeckých článků studentům na Journal cluby.2) Princip transformace pomocí A. tumefaciens: geny virulence, přenos T-DNA do rostlin. Jiné druhy rodu Agrobacterium3) Stabilní vs tranzientní transformace rostlin: transgenoze jedno- a dvouděložných rostlin; metody tranzientnítransformace listů, děloh, protoplastů. Metody stabilní transformace rostlin4) Složky transgenů - promotory, terminátory, polyadenylační signál, 5´nekódující region5) Umlčování genů - T-DNA inzerční mutageneze, RNAi techniky6) Reportérové geny a markerové linie. Selekční markery pro rostlinné transgeny - antibiotika, herbicidy, zdroj sacharidů, rostlinné hormony.7) Ztráty aktivity transgenů - transkripční a posttranskripční inaktivace transgenu, mutaceJournal club I8) GMO - tolerance k herbicidům a k hmyzím škůdcům, inhibitory proteáz.Journal club II9) GMO - jiné transgeny využívané v dnešní době. GMO v polních pokusech.Journal club III10) GMO - polní pokusnictvíJournal club IV11) GMO a legislativa v ČR. GMO vs Eko-Bio trvale udržitelné zemědělství, závěrečná diskuze12) Zápočtový testCVIČENÍ:1) Metody pěstování Arabidopsis thaliana.Prakticky: výsev Arabidopsis thaliana, ekotyp Columbia pro stabilní transformaci metodou floral-dip.2) Pěstování bakterií E. coli a A. tumefaciens, složení médií.Prakticky: příprava médií pro pěstování A. tumefaciens, očkování A. tumefaciens do tekutého média a na pevné médium.3) Tranzientní transformace - přehled metodPrakticky: tranzientní transformace listů N. bentamiana pomocí A. tumefaciens4) Prakticky: mikroskopické sledování transformovaných listů N. benthamiana5) Prakticky: tranzientní transformace semenáčků A. thaliana pomocí A. tumefaciens6) Prakticky: Mikroskopické sledování transformovaných semenáčků A. thaliana7) Metody izolace bakteriální DNAPrakticky: izolace bakteriální DNA.8) Stabilní "FloralDip" transformace rostlin A. thaliana.Prakticky: stabilní "FloralDip" transformace rostlin A. thaliana vysetých v prvním cvičení9) Prakticky: práce s transformovanými semeny A. thaliana: AraSYSTEM.10) Selekční markery pro rostlinné transgenyPrakticky: Příprava selekčních médií pro výsev semen A. thaliana. Sterilní výsev transformovaných semen.11) Prakticky: Selekce transformovaných rostlin12) Závěrečná konzultace a prezentace protokolů z praktických cvičení.

Literatura

Power-pointové prezentace z jednotlivých hodin. Davis AM, Hall A, Millar AJ, Darrah C, Davis SJ. (2009). Protocol: streamlined sub-protocols for floral-dip transformation and selection of transformants in Arabidopsis thaliana. Plant Methods 5:3. J.-F. Li, E. Park, A.G. von Arnim, A. Nebenführ . (2009). The FAST technique: a simplified Agrobacterium-based transformation method for transient gene expression analysis in seedlings of Arabidopsis and other plant species. Plant Methods 5:6. Ondřej M., Drobník J. (2002). Transgenoze rostlin. Akademia. J.-F. Li, A. Nebenführ . (2010). FAST Technique for Agrobacterium-Mediated Transient Gene Expression in Seedlings of Arabidopsis and Other Plant Species. Cold Spring Harbor Protocols, doi:10.1101/pdb.prot5428. Clough SJ, Bent AF. (1998). Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J 16:735?743.

Požadavky

Zápočtový test týkající se obsahu předmětu, aktivní účast na Journal clubech, zpracování protokolů k praktickým částem cvičení.

Garant

Mgr. Anna Kuchařová, Ph.D.Mgr. Olga Šamajová, Dr.