Předmět Metody buněčné biologie (KBBV / C426)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu KBBV / C426 - Metody buněčné biologie, Fakulta chemicko-technologická, Univerzita Pardubice (UPa).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Obsah

Časový rozvrh přednášek:1. týden: Vybavení a provoz buněčné laboratoře, zásady bezpečné práce s buněčnými liniemi, sterilní režim, technické zabezpečení, příprava pufrů a transportních médií, využití buněčných linií.2. týden: Metody kultivace buněk in vitro: kultivační média, povrchy a podmínky, základy kultivačních technik, primokultury a buněčné linie, kryoprezervace, transport buněčných linií.3. týden: Růst adherentních buněk, techniky enzymatické disociace, pasážování, růstová křivka, stanovení počtu, velikosti a viability buněk, kinetické charakteristiky, průtokové analyzátory buněk.4. týden: Kultivace na přírodních a artificiálních nosičích, kultivace buněk v suspenzi, izolace lidských buněk, separace buněk na gradientu (Ficoll, Percoll, Lymfoprep), separace buněk pomocí imunomagnetických nosičů.5. týden: Manipulace s buňkami: stimulace/inhibice proliferace, indukce/inhibice apoptózy, diferenciace buněk, cytotoxicita, proliferační testy, stanovení proteinů, hormonů nebo cytokinů v mediu.6. týden: Monitorování buněk v reálném čase, migrace buněk, využití nanotechnologie, metody tkáňového inženýrství, automatické stanice pro kultivaci buněčných linií v regenerativní medicíně.7. týden: Průtoková cytometrie: princip průtokové cytometrie, stavba průtokového cytometru, teorie kompenzace, analýza dat z průtokového cytometru.8. týden: Aplikace průtokové cytometrie: fenotypizace buněčných linií, ověření diferenciace kmene, stanovení buněčného cyklu, buněčné viability, časné a pozdní apoptózy, ROS a další aplikace, sortování buněk pomocí FACS.9. týden: Příprava buněčného lyzátu pro Western blotting a RT-PCR, izolace RNA a cDNA pro kvantifikaci specifických proteinů, DNA/RNA čipy, single cell analysis.10. týden: Mikroskopické metody: typy mikroskopických objektů, mikroskopie světlého pole, mikroskopie v temném poli, fázově kontrastní mikroskopie, interferenční mikroskopie (Nomarského diferenciální interferenční kontrast, Hofmanův modulační kontrast).11. týden: Fluorescenční mikroskopické metody: konstrukce fluorescenčního mikroskopu, fluorochromy, fluorescenční proteiny, konfokální mikroskopie, multifluorescenční konfokální mikroskopie, multifotonová konfokální mikroskopie, FRAP, FRET, TIRF.12. týden: Snímání a zpracování fluorescenčního obrazu: multikanálové snímání, morfometrická analýza, automatizovaná měření, měření intenzity fluorescence, 3-D rekonstrukce objektů.13. týden: Identifikace buněčné linie pomocí imunocytochemické identifikace povrchových CD znaků, specifické receptory a povrchové molekuly, detekce apoptotických buněk: stanovení apoptotického indexu - barvení pomocí DAPI.14. týden: Závěrečný test.

Požadavky

Prezentace vlastního projektuPísemná zkouška

Garant

Mgr. Lenka Brůčková, Ph.D.RNDr. Radim Havelek, Ph.D.RNDr. Karel Královec, Ph.D.

Vyučující

Mgr. Lenka Brůčková, Ph.D.RNDr. Radim Havelek, Ph.D.RNDr. Karel Královec, Ph.D.