Předmět Imunochemie (KBBV / C648)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu KBBV / C648 - Imunochemie, Fakulta chemicko-technologická, Univerzita Pardubice (UPa).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Obsah

Úvod do problematiky imunologie a imunochemie - základní terminologie, Antigeny - jejich druhy, struktura a funkce, Protilátky - imunoglobulinové třídy, struktura a funkce, Interakce protilátka - antigen, afinita, avidita, specifita, křížové reakceIzolace protilátek, jejich purifikace a charakterizace, příprava fragmentů a jejich identifikaceMonoklonální protilátky, polyklonální protilátky - příprava, vlastnostiZakladní imunochemicke techniky - aglutinace, hemaglutinace, hemolytické reakce, komplement fixační reakce, imunoturbidimetrie, imunodifuzni metody (radiální, dvojitá imunodifúze), imunoelektroforeticke metody (imunoelektroforéza, imunofixace, immunoblotting)Enzymová imunoanalýza - homogenní, heterogenní a kompetitvní, nekompetitivní uspořádání, kvalitativní a kvantitativní vyhodnocení, optimalizaceBiochemické techniky používané v imunochemické laboratoři - separační a analytické metody (precipitace, ultrafiltrace, spektrofotometrie, kapalinová chromatografie, gelová permeačíi chromatografie, iontově výměnná chromatografie, bioafinitni chromatografie, elektroforetické metody)Příprava konjugátů (hapten-protein, hapten-enzym, protilátka-enzym, značení radioizotopy, fluorochromy).Použití protilátek v cytologii (imunofenotypizace), histologiiPoužití protilátek, imunochemických a imunologických technik v medicíněImunoafinitní chromatografie - teorie, protilátky, způsoby imobilizace, příprava kolon, stripy, využití v praxiProteomika, metody analýzy a identifikace proteinů, peptidů - dvoudimenzionální elektroforézy, HPLC, CZE, MS, technologie microchipů)Laboratorní úlohy:RIA metody: Stanovení celkového tyroxinu v séru. Kompetitivní metody EIA a RIA (výpočet afinitní konstanty - Scatchardova závislost).Imunoenzymová analýza: Stanovení protilátek proti bílkovinám kravského mléka metodou ELISA. Optimalizace setu - titrace antigenu, titrace konjugátu.Imunoenzymová analýza: Stanovení avidity polyklonálních protilátek metodou ELISA s chaotropní látkou.SDS - elekroforéza Stanovení molekulové hmotnosti imunoglobulinů, separace H a L řetězce a stanovení jejich molekulových hmotností.Izolelektrická fokuzace - stanovení pI vybraných proteinů-antigenů.Imunoanalytické metody: Izolace IgG metodou gelové filtrace a ionexové chromatografie na DEAE celulose.Afinitní chromatografie - izolace IgG ze séra pomocí proteinu A.

Získané způsobilosti

Student bude schopen provést analýzu biologického materiálu vhodně zvolenou metodou založenou na reakci antigenu s protilátkou, bude schopen test naplánovat, optimalizovat jeho podmínky, validovat a používat k rutinní analýze biologického materiálu.

Literatura

Phillips T. M. Analytical Techniques in Immunochemistry, Marcel Dekker inc., 1992. Johnstone A., Thorpe R. Immunochemistry in practice, Blackwell Science, 1996. Bartůňková J, Paulík M. Vyšetřovací metody v imunologii, Grada, 2005.

Požadavky

Protokoly z laboratorních úloh (30 %), písemný závěrečný test (70 %).

Garant

prof. RNDr. Zuzana Bílková, Ph.D.

Vyučující

prof. RNDr. Zuzana Bílková, Ph.D.RNDr. Lucie Korecká, Ph.D.