Předmět Praktikum z biochemie (FCH-BCO_BCH_P)

Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu FCH-BCO_BCH_P - Praktikum z biochemie, Fakulta chemická, Vysoké učení technické v Brně (VUT).

Materiál	Typ	Datum	Počet stažení

Cíl

Cilem kursu je prakticky obeznamit posluchace se zakladnimi pristupy mani-pulace s biologickym materialem, s dostupnymi biochemickymi separacnimi ianalytickymi metodami a zaklady prace s enzymy. Ziskane znalosti jsou za-kladem pro dalsi vyuku praktickych disciplin specializace PCHBT,zejmena praktika z biotechnologie.

Osnova

1.blok 1. Sacharidy a) kvalitativní reakce sacharidů b) chromatografie sacharidů na tenké vrstvě2. Lipidy a) preparace lipidických frakcí z vaječného žloutku b) enzymová hydrolýza lecitinu fosfolipázou D c) identifikace lipidů z vaječného žloutku3. Lipofilní barvivaa) adsorpční chromatografie listových barviv (špenát) a karotenoidů (paprika) na tenké vrstvě, izolace frakce -karotenu b) izolace -karotenu z papriky sloupcovou adsorpční chromatografií c) RP-HPLC izolované frakce karotenu z tenké vrstvy silikagelu a ze sloupcové chromatografie - srovnání čistoty preparátů d) fotometrické stanovení izolovaných barviv4. Aminokyseliny a) chemické reakce aminokyselin a peptidů b) chromatografické dělení směsi aminokyselin papírovou chromatografií 5. Bílkovinya) stanovení celkových proteinů biuretovou metodoub) stanovení celkových proteinů Hartree-Lowryho metodou c) stanovení proteinů metodou Bradfordové (vazba Coomassie modři) d) srovnání citlivosti použitých metod kvantitativního stanovení bílkovin6. Enzymy I a) fotometrické stanovení enzymové aktivity transaminas z vepřového srdce b) určení počáteční rychlosti enzymové reakce (hydrolýza želatiny trypsinem) 7. Enzymy II - kinetikaa) substrátová specifita sacharasy b) pH optimum enzymové reakce alfa-amylasy8. Izolace a purifikace nukleových kyselin z různých zdrojůa) izolace DNA z telecího brzlíkub) izolace RNA z kvasnicc) důkaz DNA a RNA reakcí s difenylaminem 2.blok9. Izolace a částečná charakterizace enzymů z různých typů biologického materiálu a) izolace aminoxidázy z klíčků hrachu frakcionovaným srážením; dialýza b) stanovení čistoty získaných preparátů, vypracování izolačního schématu c) izolace ureasy a její aplikace ke stanovení močoviny 10. Gelová permeační chromatografie a) příprava azoderivátu bílkoviny b) příprava kolony a stabilizace sloupce, stanovení mrtvého objemu c) izolace barevného derivátu bílkoviny gelovou filtrací na Sephadexu G-25 11. Dělení bílkovin horizontální elektroforézou a) elektroforetické dělení směsi bílkovin na acetátcelulózovém nosiči b) elektroforetické dělení bílkovin v agarózovém gelu 12. Stanovení relativní molekulové hmotnosti bílkovin elektroforézou PAGE-SDS a) příprava polyakrylamidového gelu pro vertikální elektroforézu b) stanovení Mr vybraných proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS

Literatura

Nelson D.L., Cox M.M. : Lehninger Biochemistry. W.H. Freemann and Co., New York 2007. (CS)Márová I., Vránová D. : Praktikum z biochemie - pracovní sešit. FCH VUT v Brně, Brno 2002. (CS)Peč P. a kol. : Laboratorní cvičení z biochemie. FP Universita Palackého, Olomouc 2000. (CS)Ferenčík M, Škárka B. : Biochemické laboratorne metódy, Alfa, Bratislava 1981. (CS)Káš J. a kol. : Laboratorní cvičení z biochemie, VŠCHT, Praha 2000. (CS)Voet D., Voet J.G. : Biochemie. Victoria Publishing, Praha 1990. (CS)

Požadavky

Zkouška z Biochemie I.

Garant

prof. RNDr. Ivana Márová, CSc.

Vyučující

Ing. Andrea Hároniková, Ph.D.Ing. Viliam HlaváčekIng. Petra MatouškováMgr. Dana Vránová, Ph.D.prof. RNDr. Ivana Márová, CSc.