Předmět Laboratory Classes in Molecular Biotechnology (FCH-MAO_MOB_P)
Na serveru studentino.cz naleznete nejrůznější studijní materiály: zápisky z přednášek nebo cvičení, vzorové testy, seminární práce, domácí úkoly a další z předmětu FCH-MAO_MOB_P - Laboratory Classes in Molecular Biotechnology, Fakulta chemická, Vysoké učení technické v Brně (VUT).
Top 10 materiálů tohoto předmětu
Materiály tohoto předmětu
| Materiál | Typ | Datum | Počet stažení |
|---|
Další informace
Cíl
Cílem praktika je praktické zvládnutí základních technik práce s DNA, zejména její amplifikace v PCR. Dalším cílem je zvládnutí přípravy posteru.
Osnova
1. Uspořádání PCR laboratoře. Bezpečnost práce. Pipetování malých objemů. 2. Kultivace buněk Lactobacillus casei pro izolaci bakteriální DNA. Ověření čistoty bakteriální kultury. 3. Lyze buněk a příprava hrubého lyzátu. 4. Deproteinace DNA pomocí fenolu. Srážení DNA ethanolem. 5. Ověření intaktnosti DNA pomocí gelové elektroforézy na agaróze. Vizualizace DNA a dokumentace gelu. 6. Spektrofotometrické stanovení koncentrace a čistoty DNA. 7. Příprava PCR směsi pro amplifikaci specifického úseku DNA Lactobacillus s použitím purifikované DNA matrice. Negativní kontrola. 8. Provedení PCR reakce. 9. Detekce PCR produktů pomocí gelové elektroforézy na agaróze. 10. Výpočet délky amplifikonu pomocí standardů a programu Bionumerics. 11. Izolace celkové DNA z hrubých lyzátů buněk mléčného výrobku (probiotického nápoje) metodou magnetické separace s využitím magnetických částic P (HEMA-co-GMA). 12. Amplifikace DNA Lactobacillus v mléčném výrobku (probiotický nápoj) pomocí PCR v reálném čase. 13. Test a kontrola protokolů.
Literatura
Sambrook F., Russell R. W.: Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 2001. (EN)
Požadavky
Je nutné souběžně si zapsat předmět Bioanalytické metody.
Garant
doc. RNDr. Alena Španová, CSc.
Vyučující
doc. RNDr. Alena Španová, CSc.