Bi1700_2012_04_Cytoskelet

Amanita phalloides) 

konjugovaný s fluorochromem - přímé značení AF

• fluorescenčně značená protilátka (přímá a 

nepřímá imunofluorescence)

• GFP a jeho deriváty
II) Elektronová mikroskopie - ultratenké řezy
• protilátka konjugovaná s částicemi kovu 

(imunoznačení pro ELM)

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

I.a. Fluorescenční mikroskopie

• temné pole (dark-field, DF)

• excitační a emisní filtry

• barviva - fluorochromy

• fluorescein (FITC), Cy3
• rhodamin (TRITC), 

Cy5, Texas Red, 

ethidium bromid (EB), 

propidium jodid (PI)

• kumariny, DAPI, bis-

benzimid (Hoechst)

• komerční: AlexaTM aj.

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

α-tubulin / F-aktin / DNA

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

I.b. Konfokální mikroskopie

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

27 snímků / 6 µm

I.b. Konfokální mikroskopie

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

Myší fibroblast: α-tubulin / F-aktin / DNA

Přímé značení:
Phal oidin-TRITC 

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

přímá

nepřímá

Imunofluorescence - princip metody

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

α-tubulin / F-aktin / DNA

F-aktin

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

GFP = Green Fluorescent Protein

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

Barevné modifikace GFP • YFP, RFP...

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

Růst mikrotubulů v rostlinných buňkách (

Lotus)

GFP fúzováno s α-tubulinem

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

II. Elektronová mikroskopie (TEM) - ultratenké řezy

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

Immunogold-label ing (značení koloidním zlatem): 

10 nm glutamated tubulin, 5 nm tyrosinated tubulin

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

MIKROTUBULY

Bi1700 Buněčná biologie / 04 / 8.10.2012

Typy mikrotubulárních struktur v buňkách

• síť cytoplazmatických mikrotubulů
• mitotický aparát (dělící vřeténko)
• MTOC (mikrotubuly organizující centrum)
• kinocilie (bičíky, řasinky) - živočišné buňky