PATOLOGIE1-úvod

Zalévání bločků do parafínu:

• Princip: prosycení odvodněné tkáně rozehřátým parafínem při teplotě 56-58 stupňů

• Parafín vyplní všechny mikroskopické štěrbiny v tkáni = krájení tkáně na tenké řezi

• Nejpoužívanější zalévací technika

• Snadná, rychlá, parafín je levný a dostupný

• Nevýhoda: smrštění při odvodňování a prosycování tkáně parafínem při poměrně vysoké teplotě

Etapy zalévání bločků:

• Prosycení tkáně parafínem:

  • Při běžnémzálevání pevádíme tkáň prosycenou xylenem do dvou lázní parafínu rozpuštěného při 56 a 58 stupňů

• Vlastní zalití:

  • Používá se zkvalitněný a přefiltrovaný parafín

  • Do rozlévací komůrky se nalije zahřátý parafín a rychle se do něho přenese tkáňový bloček, podle potřeby se onentuje

  • Přiložíme zalévací rámeček s číslem, dolijeme parafín a necháme ztuhnout

Zalévání bločků do celoidinu:

Zalévání bločků do medií rozpustných ve vodě:

• Používá se v případech, kdy tkáň nesmí přijít do styku s organickými rozpouštědli (xylen, ethanol, ether)

• Výhoda= tkáň se nemusí odvodňovat a není vystavena působení vyšších teplot => nesmrští se

Krájení tkáňových bloků:

• Z tkáňových bločků se zhotovují histologické řezy tenké několik tisícin mm

• Krájí se na speciálních přístrojích = MIKROTOMY

• Dle konstrukce rozeznáváme mikrotom:

  • Sáňkový

  • Rotační

  • Zmrazovací

• Zmrazovací slouží ke krájení nezalité tkáně nebo tkáně zalité do želatiny zmrazené oxidem uhličitým

Barvení:

• Různé součásti buněk a tkání vážou různá barviva

• Dají se v mikroskopu odlišit

• Řezy barvíme vhodnými barvivy

• Dělíme na:

  • Zásaditá (bazická)- barví intenzivně jádra buněk

  • Kyselá (oxyfilní)- barví cytoplazmu buněk (eosin)

  • Barvení hematoxylinem a eosinem= nejzákladnější a nejpoužívanější metoda

  • Mnoho metod ale téměř vždy jde o kombinaci bazického barviva s jedním nebo více plazmatických barviv

Odparafínování:

• Barvení řezů= vodné roztoky barviv => musíme řezy zbavit parafinu

• Používáme XYLENY (nerozpustný ve vodě)

• Po rozpuštění parafínu přeneseme preparáty sestupnou řadou ethanolů (96,80,70%) až do vody

• Odparafínování vždy před barvením

Uzavírání obarvených řezů:

• Obarvené řezy uzavřeme mezi podložní a krycí sklíčko do uzavíracího media

• Medium musí být látka dokonale průhledná, nesmí poškozovat zbarvení tkáně a musí mít vysoký index lomu světla

• Látky k uzavírání dělíme na dvě skupiny:

  • Látky, které se nemísí s vodou, ale rozpouštějí se v xylenu (kanadský balsám, solakryl)

    • Obarvení řezy nemůžeme uzavírat do těchto látek přímo

    • Nejprve odvodnit vzestupnou řadou ehtanolů

    • Prosytit xylenem

    • Vlastní uzavření

  • Látky, které se mísí s vodou (glycerin, glycerinová želatina)

    • Obarvené řezy uzavíráme přímo

    • Bez odvodnění

    • Uzavíráme nesmí-li tkáň přijít do styku s vysokoprocentním ethanolem a s xylenem (průkaz lipidů)