Cvičení č. 6 Důkaz bílkovin

Fyziologie živočichů

Cvičení č. 6: Důkaz bílkovin

Úkol č. 1: Koagulace bílkovin varem

Materiál a pomůcky: bílkovinný roztok BR (vaječný bílek ve 150 ml 0,9% NaCl – savčí fyziologický roztok, filtrace na skleněné vatě od chalátu), kyselina octová CH3COOH (5%), zkumavka, vodní lázeň

Pracovní postup:

Ke 2 ml bílkovinného roztoku ve zkumavce přidáme 1 – 2 kapky CH3COOH a povaříme.

Výsledky:

Varem se bílkoviny vysrážely ve formě bílé rosolovité neprůhledné sraženiny.

Závěr:

Dokázali jsme, že vlivem varu nastává koagulace bílkovin. Bílkoviny tedy varem ztrácí své původní vlastnosti a stávají se nerozpustné (mění se ve sraženinu), dochází tak k denaturaci nativních bílkovin.

Úkol č. 2: Vysolování bílkovin těžkými kovy

Materiál a pomůcky: BR, nasycený roztok octanu olovnatého, síran amonný a měďnatý (1%), zkumavka

Pracovní postup:

Ke 2 ml bílkovinného roztoku ve zkumavce přidáme 3 – 5 kapek octanu (síranu).

Výsledky:

V čirém roztoku se na dně zkumavky objevily bílé chomáčky denaturovaných bílkovin.

Závěr:

Dokázali jsme vysrážení bílkovin z roztoku vlivem vysolování těžkými kovy, které způsobují denaturaci bílkovin.

Úkol č. 3: Koagulace kyselinami

Materiál a pomůcky: BR, koncentrovaná kyselina dusičná HNO3, nasycený roztok hydroxidu sodného NaOH, zkumavka, vodní lázeň

Pracovní postup:

Ke 2 ml bílkovinného roztoku ve zkumavce přidáme 1 – 2 ml HNO3. Poté zahřejeme ve vodní lázni. Následně zkumavku ochladíme a přidáme 3 – 4 ml NaOH.

Výsledky:

Přidáním HNO3 do bílkovinného roztoku došlo ke koagulaci bílkovin, přičemž se vytvořila bílá sraženina. Po zahřátí zkumavky ve vodní lázni se sraženina rozpustila na žlutý roztok. Ochlazením a přidáním NaOH vznikla ve žlutém roztoku pomerančově červená sraženina.

Závěr:

Srážení bílkovin lze též uskutečnit přidáním kyseliny.

Úkol č. 4: Kvalitativní důkaz bílkovin – prostá biuretová reakce

Materiál a pomůcky: BR, 1% roztok peptidu, 10% NaOH, 1% síran měďnatý CuSO4, zkumavky

Pracovní postup:

Ke 2 – 3 ml bílkovinného roztoku v první zkumavce přidáme 2 – 3 ml NaOH a 5 – 10 kapek CuSO4, zamícháme. Do druhé zkumavky dáme 2 – 3 ml peptidu, přidáme 2 – 3 ml NaOH a 5 – 10 kapek CuSO4, zamícháme.

Výsledky:

V první zkumavce (s BR) po zamíchání vzniklo růžovofialové zbarvení. Ve druhé zkumavce (s peptidem) po zamíchání vzniklo modré zbarvení.

Závěr:

Tento proces – prostá biuretová reakce – se využívá k rozlišení bílkovin a peptidů. V obou případech se vytváří biuret, který způsobuje změnu zbarvení. Barva se mění (frekvence viditelného elektromagnetického záření se zvyšuje) s délkou peptidového řetězce.

Úkol č. 5: Oddělování iontů a solí od bílkovin

Materiál a pomůcky: BR, 1% dusičnan stříbrný AgNO3, celofán, skleněná trubička, nit, kádinka, voda, zkumavky