Protokol - Biologie 2
Níže je uveden pouze náhled materiálu. Kliknutím na tlačítko 'Stáhnout soubor' stáhnete kompletní formátovaný materiál ve formátu PDF.
11. Před přechodem na větší zvětšení je nutné nejprve obraz vycentrovat (sledovaný objekt umístěte
co nejpřesněji do středu zorného pole) a teprve potom vyměnit objektiv. Při změně objektivu
neposouvejte stolek ani preparát a poté už obraz doostřete pouze mikrošroubem.
12. Pokud nemůžete na vyšší zvětšení zaostřit, vraťte se zpět k nejnižšímu zvětšení a zaostřete a
vycentrujte obraz co nejpřesněji.
13. Při vyšším zvětšení je potřeba použít menší clonu – pracujte se clonou.
14. Jakmile ukončíte prohlížení preparátu, ztlumte osvětlení na minimum a mikroskop vypněte. Po
práci důkladně očistěte objektivy a ukliďte své pracovní místo.
Protokol č. 2
Prokaryotické buňky
Biologický ústav LF MU
Podzim 2024
2
ÚLOHA 1: POZOROVÁNÍ TRVALÝCH PREPARÁTŮ BAKTERIÍ BARVENÝCH PODLE GRAMA
Materiál:
Trvalé preparáty Escherichia coli a Staphylococcus aureus barvené podle Grama, základní
mikroskopické pomůcky
Provedení: Gramovo barvení peptidoglykanu v buněčné stěně bakterií je nejčastěji používaným barvením
v diagnostice bakterií. Odlišuje Gram-pozitivní (G+) a Gram-negativní (G-) bakterie podle typu buněčné
stěny. Slouží také jako orientační barvení pro zjištění velikosti a tvaru bakterií, a usnadňuje tak
identifikaci bakterií v pozorovaném vzorku.
Nátěr bakterií na podložním skle je fixován teplem a obarven krystalovou violetí. Poté je aplikován
Lugolův roztok. Následuje odbarvování preparátu etanolem nebo acetonem, které je vlastním
diferenciačním krokem – zatímco G+ bakterie se neodbarví a zůstanou tmavě fialové, G- bakterie se
zcela odbarví. Posledním krokem je barvení safraninem (nebo karbol-fuchsinem), který nabarví
odbarvené G- bakterie červenorůžově, zatímco G+ bakterie zůstanou tmavě fialové.
Pozorujte tvary bakterií, zda tvoří shluky a zhodnoťte, jestli jsou Gram-pozitivní, nebo Gram-negativní.
Výsledky:
a) Trvalý preparát Staphylococcus aureus barvený podle Grama:
b) Trvalý preparát Escherichia coli barvený podle Grama:
Závěr: a) Na mikroskopu vyučujícího změřte, jaká je skutečná velikost bakteriální buňky.
b) Proč se různé typy bakterií barví Gramovým barvením odlišně?
Protokol č. 2
Prokaryotické buňky
Biologický ústav LF MU
Podzim 2024
3
ÚLOHA 2: GRAMOVO BARVENÍ BAKTERIÍ Z ÚSTNÍ DUTINY
Materiál:
Mezizubní kartáček, mikroskopické podložní sklo, destilovaná voda, kapátko, očkovací klička, pinzeta,
plynový kahan, Hellendalovy dózy na barvení mikroskopických preparátů, komerční sada reagencií pro
Gramovo barvení (roztok krystalové violeti a šťavelanu amonného 1:4, Lugolův roztok, roztok karbol-
fuchsinu), střičky, 70% ethanol, filtrační papír, popisovací fixa, mikroskop
Provedení: Fixou označte své podložní mikroskopické sklo na horní stranu monogramem, ať víte, na které straně
skla se bude nacházet vzorek. Na střed podložního skla naneste kapátkem 1 malou kapku destilované
vody. Mezizubním kartáčkem odeberte vzorek z vlastní ústní dutiny z mezizubních prostor mezi
stoličkami, naneste ho do připravené kapky vody a rovnoměrně rozetřete po středu podložního skla (cca
2x2 cm oblast). Nepřikládejte krycí sklo. Přesuňte se do laboratoře.
Podložní sklo uchopte pinzetou a 3x krátce projeďte nad koncem plamene plynového kahanu – vždy
bakteriálním vzorkem nahoru, aby plamen pouze ohříval sklo, ale neponičil vzorek (probíhá fixace
buněk, v případě potřeby zopakujte do uschnutí vody).
Fixovaný preparát obarvěte Gramovým barvením:
1) Na 30 sekund vložte podložní sklo do Hel endahlovy dózy s roztokem krystalové violeti a šťavelanu