Plazmatické bílkoviny

7. Plazmatické bílkoviny

• V lidské plazmě několik set bílkovin

• Tvoří se z AMK v játrech (slezině, KD, lym. Uzlinách)

• Syntéza řízena hormonálně

• Fyziologická hodnota 62-82 g/l

• Hypoproteinémie - podvýživa, ztráty do moči, hepatopatie

• Hyperproteinémie - zhoubný nádor (myelom - nádor KD), dehydratace

• Makromolekuly tvořené polypeptidovým řetězcem s více než 100 AMK

• Biologický poločas bílkovin je několik hodin, několik dní až týdnů

• Konečným produktem metabolismu bílkovin je urea, která vzniká v játrech

• V krvi mají negativně nabitý náboj - anionty

Struktura

• Primární - AMK vázané peptidovou vazbou

• Sekundární - řetězce AMK vytváří určité prostorové útvary (šroubovice - alfa - Helix, skládaný list

• Terciální - vzájemně pospojování a zpevnění šroubovice a skládaného listu disulfidickými můstky

• Kvartérní - agregace proteinových podjednotek do molekuly komplikovaného proteinu (Hb, myoglobin)

Význam bílkovin

• Udržování osmotického tlaku

• Transport minerálů, hormonů, léků, lipidů

• Obrana proti infekci - IgG, komplement

• Hemokoagulace, udržování ABR

• Enzymy a inhibitory enzymů

• Antioxidanty

• V případě nouze zdroj energie

Možnosti stanovení

• Podle Kjeldahla

  • stanovuje se dusík bílkovin, který tvoří 16 % jejich koncentrace

  • Metoda složitá a zdlouhavá; pouze pro vědecké a experimentální účely

• Biuretovým činidlem

  • V praxi se používá nejčastěji

  • Měďnaté ionty reagují s látkami obsahující nejméně dvě peptidové vazby za vzniku růžových komplexů

  • Biuretové činidlo obsahuje mědnaté ionty, NaOH, komplexan III, který brání okamžité reakci iontů s NaOH

• Vazbou bílkovin na barviva - na barvivo Ponceau, amidočerň

• ELFO

  • Elektroforéza

  • Dělení na základě rozdílného pohybu bílkovin ve stejnosměrném poli v závislosti na velikosti náboje

• Imunochemicky

  • Pomocí specifické protilátky (detekce komplexů Ag - Ab)

Imunochemie

• Kombinace imunologických a biochemických metod

• Základem je reakce antigenu (Ag) a specifické protilátky (Ab) za vzniku imunokomplexu Ag-Ab

• Antigen je látka schopná vyvolat v těle tvorbu specifické protilátky a navázat se na ni

  • Ag = vysokomolekulární látka, polymer - bílkovina

  • Kompletní antigen vyvolá tvorbu protilátky přímo

  • Hapten = nekompletní antigen (hormon, lék, peptid), který vyvolá tvorbu protilátky až po vazbě na bílkovinný nosič (albumin)

• Protilátky jsou bílkoviny schopné vazby s antigenem, na jehož podnět se vytvořily

  • K laboratornímu průkazu antigenu se využívají uměle vytvořené antiséra s obsahem protilátek

  • Monovalentní antiséra - Ab proti jednomu Ag

  • Polyvalentní antiséra - Ab proti více Ag

Reakcí antigenu a protilátky vzniká komplex antigen protilátka, který se projeví aglutinací (shlukováním), nebo precipitací (srážením). Příkladem aglutinace je shlukování Ery - hemaglutinace - v přítomnosti hemaglutininů. Precipitace se projeví zákalem v roztoku, nebo vznikem precipitační linie na agaru, nebo agaróze.