Cvičení č. 7 Trávení - stanovení činnosti trávicích fermentů

Fyziologie živočichů

Cvičení č. 7: Trávení – stanovení činnosti trávicích fermentů

Úkol č. 1: Orientační stanovení pH slin

Materiál a pomůcky: univerzální pH papírek, sliny

Pracovní postup:

Univerzální pH papírek krátce vložíme do úst a po srovnání s barevnou stupnicí určíme pH slin.

Výsledky:

Zbarvení pH papírku odpovídalo hodnotě pH 7.

Závěr:

Dokázali jsme neutrální pH slin. Zdravý člověk má fyziologické pH v rozmezí 6,65 – 7,15, tedy neutrální. Hlavní funkcí slin je neutralizace kyselin a udržování neutrálního prostředí v dutině ústní, což má za význam hlavně v ochraně zubů před zubním kazem.

Úkol č. 2: Trávení škrobu ptyalinem

Materiál a pomůcky: roztok škrobu, zkumavky, sliny, Fehlingovo činidlo (I a II)

Pracovní postup:

Do jedné zkumavky dáme zředěný roztok škrobu a přidáme sliny. Do druhé zkumavky dáme pouze škrobový maz. Poté temperujeme asi ½ hodiny při 37 – 38 °C. Následně provedeme Fehlingovu zkoušku (přidáme 2 ml směsi Fehlingu I a II). Ve zkumavce se slinami se objeví červené (žlutočervené zbarvení svědčící o přítomnosti glukózy.

Výsledky:

V první zkumavce se slinami se objevilo žlutočervené zbarvení. Ve druhé zkumavce bez slin vzniklo modré zbarvení.

Závěr:

Fehlingovou reakcí jsme dokázali štěpení škrobu ptyalinem, který je obsažen ve slinách. Pomocí slin tedy dochází k rozštěpení škrobu na jednodušší sacharidy (obsahující glukózu).

Úkol č. 3: Trávení bílkovin pepsinem

Materiál a pomůcky: 2% pepsin (2 – 3 g pepsinu rozpuštěného v 50 ml vody), zkumavky, 0,4% HCl, destilovaná voda, bílek (bílkovinný roztok BR)

Pracovní postup:

Do zkumavek napipetujeme následující roztoky:

Zkumavka Pepsin HCl BR H2O 1. 3 ml 2 ml 3 ml 7 ml 2. 3 ml 2 ml 3 ml 7 ml 3. 3 ml 2 ml – 7 ml 4. 3 ml – 3 ml 9 ml 5. – 2 ml 3 ml 10 ml

2. zkumavku povaříme.

Zkumavky temperujeme v termostatu při 38 °C asi 40 minut. V každé provedeme biuretovou reakci (důkaz peptidové vazby za pomoci roztoků NaOH a CuSO4).

Výsledky:

Výsledná tabulka 1: Zbarvení jednotlivých roztoků

Zkumavka Zbarvení 1. 2. nejsvětlejší 2. 1. nejsvětlejší 3. čiré 4. 2. nejtmavší 5. 1. nejtmavší

Závěr:

Fialovým zbarvením jsme dokázali přítomnost bílkovin. Čím byla barva světlejší, tím intenzivnější štěpení (zkracování řetězce) bílkovin nastalo a tím více byly bílkoviny natráveny. Nejvíce natrávené bílkoviny byly po přidání pepsinu a HCl s následným povařením, naopak vůbec nebyly natráveny bílkoviny, k nimž jsme pepsin nepřidali. Ve 3. zkumavce nenastalo žádné zbarvení a ani nedošlo k žádné reakci, protože v ní nebyl obsažen bílkovinný roztok.

Tímto jsme dokázali trávení bílkovin pepsinem.

Úkol č. 4: Trávení bílkovin trypsinem

Materiál a pomůcky: zkumavky, kádinka, 2 – 3 g pankreatinu (rozemletá slinivka břišní), destilovaná voda, 0,2% uhličitan sodný Na2CO3, BR