Dg. krevního srážení

Trombelastografie (TEG)

• Koagulační metoda umožňující sledovat tvorbu koagula

• Z typu výsledné křivky lze usuzovat na funkci jednotlivých komponent hemostázy (počet a funkce destiček, plasmatických koagulačních faktorů, fibrinolýzy)

• Poskytuje kvalitativní i kvantitativní ukazatele hodnoticí tvorbu, stabilitu i retrakci koagula

Biologický materiál pro koagulační vyšetření

• Podmínkou srážení krve je přítomnost Ca2+ iontů v plazmě

• Nesrážlivost odebrané krve

  • Citrát sodný 1: 9 do plné krve hemokoag. vyš.

• vytěsnění Ca2+ iontů ionty Na+

  • K3EDTA

  • Heparin

• Plazma - centrifugace krve s protisrážlivým činidlem

  • obsahuje všechny koagulační faktory

  • Sérum – tekutina vytlačena retrakci koagula ze sražené krve

  • neobsahuje termolabilní koagulační faktory

• Biologický materiál pro koagulační vyšetření

  • Plazma (nehodí se sérum)

  • Koagulační vyšetřeni je nutno provádět do 2 h po odběru krve

  • Centrifugace – separace frakci krve na základě měrné hmotnosti frakci a gravitační sily

  • Nutno dodržet předepsanou gravitační silu a čas centrifugace

    • g = 1,118 .r .n2 .10 -5 r - poloměr

    • n – počet otáček/min

Příprava biologického materiálu

• Citrátová plazma

  • PPP (platelet poor plasma) - > 1000g/ 10 min, odsát pipetou

  • PRP (platelet rich plasma) – 200 – 400g/10 min

• EDTA plazma

  • 1000 g/ 20min

• Sérum – odběr krve do sterilních zkumavek

  • sražení při 37 °C/ 30- 60 min a centrifugace 1000g/ 20 min

  • 4 °C/ 16 – 24 h

• Zpracování biologického materiálu

• Koagulační testy

• Správný žilní odběr - nesrážlivá krev 1: 9

• Zpracovaní odebraného materiálu do 2 h

• Centrifugace (plazma bohatá na destičky PRP plazma chudá na destičky PPP)

• Normální plasma

Princip koagulačních testů

• Koagulační

  • Jednotlivé složky koagulačního systému jsou přítomny v plazmě ve formě neaktivních složek – proenzymů. Aby srážecí proces mohl proběhnout, je nutná aktivace proenzymů aktivátory.

• Aktivátory

  • Nefyziologické: silika, kaolin, celit

  • Fyziologické: tkáňové extrakty ( tromboplastin z králičích mozků) v minulosti

  • dnes čištěné nebo rekombinantní aktivované koagulační

• Faktory:

  • Specifické - zmijí jedy

  • Enzymatické testy vyžadují faktory aktivované aktivátory

  • aktivované kofaktory

  • fosfolipidy ( zdroj krevní destičky )

  • vápníkové ionty ( Ca2+)

• Princip: měří se reakční čas od spuštění reakce až po vytvoření zjistitelného koagula nebo fibrinového vlákna. Naměřené časy se porovnávají s časy standardní povolované normální plazmy, která se považuje za normu.

• Detekce vzniku fibrinoveho vlakna

• PP + Ca2+ + reagencie koagulum (s)

• PN + Ca2+ + reagencie koagulum (s)

• Detekce koagula

  • Vizuální/ mechanické (vznik fibrinového vlákna)

  • Fotooptická (zákal měřeného systému)

  • Elektrická

  • Magnetická

Vyšetřovací metody v hemostáze

• Koagulační – čas nutný k vytvoření fibrinového vlákna

• Zákalové - (nefelometrické, turbidimetrické) - množství odraženého světla na částicích koloidního charakteru

• Spektrofotometrické (chromogenní substrát)

• Imunochemické – Ag koncentrace < 1ng/ 1ml

  • Elisa(enzymoimunoanalýza) – protilátka zn.enzymem

  • EID (elektroimunodifuze) – stejnosměrný el. proud

  • LIA (světelná/ laserová imunoanalýza)

  • RIA (radioimunoanalýza) - radionuklid

  • Latex – aglutinační testy – latexové částice s protilátkou

  • Hemaglutinační testy – receptory na erytrocytech