Biologie člověka
Níže je uveden pouze náhled materiálu. Kliknutím na tlačítko 'Stáhnout soubor' stáhnete kompletní formátovaný materiál ve formátu DOCX.
Výměny sesterských chromatid (SCE):
Výměna sesterských chromatid, viditelná po přidání bromdeoxyuridinu (analog tyminu) do kultivačního media.
Rozlišení DNA syntetizované před 1., 2. a dalšími mitózami.
Mutageneza a mitotická aktivita buňky.
FISH – fluorescenční in situ hybridizace
Metoda FISH:
FISH – spojení postupů klasické cytogenetiky a technologie molekulární genetiky
Jednovláknová (denaturovaná) sonda DNA
Vazba k cílové sekvenci na principu komplementarity
Použití v interfázi i mitóze
Sonda označena fluorochromem (Texas Red, FITC …)
Sondy centromerické – alfa satelitní sekvence DNA přítomné v oblasti centromery (počet chromosomů)
Sondy lokus-specifické – váží se na vybraný lokus (mikrodelece,
translokace)
Sondy malovací (celochromosomové) – směs fragmentů DNA konkrétního chromosomu, nelze použít v interfázi, pouze v metafázi (strukturní aberace – inserce, translokace, marker chromosomy, ring-chromosomy)
Multispektrální analýza:
Přesná identifikace každého chromosomu, chromosomových párů
Původ rekombinovaných chromosomů, které se často nacházejí v nádorových buňkách
Zpracování vyžaduje použití několika technik založených na poznatcích fyziky, chemie (Fourierova spektroskopie)
Přístrojové vybavení - zařízení pro zobrazení spektra barev vybuzeného elektrickým nábojem, optický mikroskop
Spektrální karyotypování
Nádorové buňky mívají změněný počet a strukturu chromosomů
Heteroploidní, pseudodiploidní počet chromosomů
Chromosomální přestavby - delece, translokace, marker chromosomy, ring chromosomy, isochromosomy...
Změny v karyotypu - náhodné, nenáhodné
Protoonkogeny myc:
Rodina protoonkogenů myc (virus myeloblastózy kuřat)
N-myc – neuroblastom
L-myc – malobuněčné karcinomy plic
Regulace buněčného cyklu - geny časné odpovědi
Aktivace např. růstovými faktory nebo amplifikace genu
Amplifikace sekvence DNA
Homogenně zbarvené oblasti (HSR)
Samostatné útvary – double minutes
Diagnostický a prognostický marker
Rodina protoonkogenů myc (virus myeloblastózy kuřat)
N-myc – neuroblastom
L-myc – malobuněčné karcinomy plic
Filadelfský chromosom:
*Ke zkoušce
Filadelfský (Ph) chromosom - reciproká translokace mezi chromosomem 9 a 22 { t(9;22)(q34;q11) }
Cytogenetický marker u 90% případů chronické myeloidní leukemie (CML) a u 5 - 20%případů akutní lymfocitární leukemie (ALL)
5% Ph negativních pacientů - cryptický fuzní gen BCR-ABL detekovatelný metodami molekulární genetiky
2.5% CML pacientů - negativní pro Ph chromosom i pro BCR-ABL fuzní gen
Translokace - fuzní gen BCR-ABL, zlom v BCR ("breakpoint cluster region") genu na chromosomu 22 a ABL (Abelson onkogen) genu na chromosomu 9
CML - produkt fuzního genu je protein 210 kD, má transformační schopnosti
Fuzní gen BCR-ABL– výsledek fuze buď exonu b2 BCR nebo exonu b3 BCR s ABL exonem a2 (b3a2 nebo a b2a2 fuze)
70% Ph+ případů ALL - fuzní gen BCR-ABL zahrnuje BCR exon e1 a ABL exon a2, (e1a2 fuze), produkt je 190 kD (p190) protein.
30% případů Ph+ ALL - produkt fuzního genu je p210 jako u pacientů s CML