skripta

1.8. Tkáňové kultury
 Tkáňové kultury jsou jednou z možností studia  chování různých typů buněk za "normálních" i experimentálních pod-
mínek in vivo. Původní techniky  pocházejí z počátku tohoto století. Drobné kousky  tkání byly pěstovány v médiu
tvořeném kapkou krevní plazmy a tzv. "embryonálním extraktem". Po přidání embryonálního extraktu během několika
vteřin  se vytvoří fibrinová síť a kapka "gelifikuje".  Uvnitř této kapky vyrůstaly z explantátu buňky mezenchymálního
původu, po povrchu se rozrůstaly  buňky epitelů. V současné době mají tyto metody  jen historický význam, neboť byly
velmi pracné  a zisk buněčných kolonií byl nepatrný. Jsou nahrazeny kultivací buněk ve větších kultivačních nádobkách
v plně syntetickém médiu (tedy v médiu  o známém složení). Umožňují vypěstování buněčné  populace z jedné buňky,
tedy buněk zcela identických. Mohou být využity nejen ke studiu různých  buněčných populací za různých, přesně
definovaných  podmínek, ku sledování jejich metabolismu, k morfogenetickým studiím, ale i sledování maligní  trans-
formace buňky, případně interakcí virus-buňka a pod. Představují tedy velmi účinný nástroj  pro intravitální studium
buněk a jejich základních  pochodů. (Nesmí být však opomenuto, že buňky v organismu (in vivo), díky jeho regulačním
a kontraregulačním schopnostem, se mohou chovat jinak, než  buňky v experimentu in vitro).

1.9. Mrazové lámání
 Mrazové lámání je technika vyvinutá pro elektronovou mikroskopii a právě jí vděčíme za řadu  poznatků o membrá-
nách, ale i dalších ultrastrukturách buňky. Princip techniky spočívá v tom, že  drobný fragment nefixované tkáně se
zmrazí v přístroji při velmi hluboké teplotě (okolo –100° C)  a rozřízne se. Při tom velmi často, právě v oblasti lipidové
dvojvrstvy membrány dojde k jejímu  rozštěpení a částečnému odhalení vnitřního uspořádání, nebo odtržení dvou na
sebe těsně naléhajících membrán. Tak bývají obnaženy povrchy membrán  naléhající na cytoplazmu buňky (P-povrch =
protoplazmatický) nebo zevní povrchová vrstva (E-povrch = externí). V přístroji je vytvořeno velmi vysoké  vakuum.