skripta

 Je také možné využít intenzivněji reagujících  technik - lektin s navázaným avidinem - a po této  primární reakci pře-
vrstvit vizualizovatelným márkrem s navázaným biotinem, případně po navázání  lektinu použít připravené protilátky
proti lektinu, která může být primárně označena nebo je značena až druhá protilátka, namířená proti druhu  zvířete -
dárce prvé protilátky (podobně jako  u imunohistochemických reakcí).

1.6. Autoradiografie
 Autoradiografie je další metoda, která  umožňuje cytochemické studium. Základem takových  metod je podání zvířeti
biologicky důležité látky  (např. jodidu při studiu štítné žlázy nebo v řadě  jiných studií některé aminokyseliny), která je
radioaktivní. Po zvoleném časovém úseku je zvíře  usmrceno a studovaná tkáň je po fixaci zalita  a nakrájena na řezy.
Po odparafínování se ve tmě  povléknou podložní skla s řezy fotografickou emulzí. Tato emulze je v zásadě dvojího
druhu: 1)  připravená emulze na podložce (tzv. stripping  film), která se od podložky uvolní a přiloží na  sklo s řezy, 2)
želatinová (po mírném zahřátí tekutá) emulze, která se vlažná nakape na sklo s řezy a vytvoří (dle zředění) i podstatně
tenčí vrstvy. Po vyzkoušení expozice, (která často trvá  i několik týdnů) se preparát vyvolá. V některých  případech, pro
snadnější orientaci, je možné  i další jednoduché dobarvení preparátu. Během expozice radioaktivní záření vytvoří ve
fotografické  emulzi latentní obraz, který je vyvoláním vizualizován. V dostatečně tenké vrstvě, v jemnozrnné  emulzi,
při dobré expozici se vytvoří obraz tvořený mikroskopickými zrny kovového stříbra, který  poskytne velmi dobré in-
formace o lokalizaci radioaktivního materiálu. Je-li vytvořen správný časový sled různých stadií, je  výsledkem dobrý
přehled o rychlosti pohybu podaných látek a lokalizaci produktů jejich metabolismu. Tyto metody při správném prove-
dení poskytnou  nejen topografické a kvalitativní, ale i kvantitativní údaje.
 Obdobnou techniku lze užít i na úrovni elektronového mikroskopu.
 Pro ilustraci můžeme uvést výsledky studie inkorporace aminokyselin do polypeptidů syntetizovaných buňkami Lan-
gerhansových ostrůvků u Lophius  (ryba) a jejich transport v buňce.(Exokrinní a endokrinní buňky pankreatu jsou čas-
tým modelovým objektem biochemických a cytologických studií.)
 Řezy ostrůvky (nativní) byly inkubovány 45  minut v médiích obsahujících 3H tryptofán a 35S  cystein. Po inkubaci
byly přeneseny do nového média (bez radioaktivních aminokyselin) a z něho byly odebírány v určených časových in-
tervalech a dále zpracovávány. 3H tryptofán byl vestavěn do  proglukagonu a glukagonu, ale i do prosomatostatinu a
somatostatinu-14. 35S cystein byl vestavěn do  proinzulínu a inzulínu, ale i do prosomatostatinu  a somatostatinu. Obr.