skripta

1.5. Histochemie
 V řadě studií se musí pracovník obeznámit též  s chemickým základem studovaných komponent.

1.5.1. Tuky
 Jedním z objektů studia mohou být tukovité  substance, tvořící jednak zásobní látky buněk  v organismu (zpravidla
triacylglyceroly), jednak  stavební komponenty (cholesterol, fosfolipidy  atd.).
 Obzvlášť jednoduché je zobrazení prvé skupiny (triacylglycerolů). Jak bylo již výše upozorněno, vysokoprocentní
alkohol a prosycovací média  (toluen) rozpouštějí tuky a je tedy nutné se jich  vyvarovat. Pro fixaci tedy volíme nejčas-
těji formaldehyd a řezy zhotovíme na zmrazovacím mikrotomu. Tak zůstane převážná většina tukovitých látek v řezech
zachována a jejich barvení je jednoduché.  Barvivo (olejovou červeň, sudanovou čerň) rozpustíme v nízkoprocentním
etylalkoholu (70 %) nebo  v 60 % isopropylalkoholu, řezy zde obarvíme, případně dále dobarvíme na jádra a pozoru-

¶ 6 ·

jeme v glycerinové želatině. Tukové kapky jsou zbarveny ostře červeně (olejovou červení) nebo temně modře až  černě
(sudanovou černí). Barvivo se fyzikálním  procesem z barvicího roztoku rozpustí v dostatečné  koncentraci v tukovitých
substancích tkáně. Průkazy cholesterolu a jeho derivátů, případně jiných  lipoidních substancí (fosfolipidy, sfingosiny  a
pod.), jsou podstatně složitější.

1.5.2. Aldehydické skupiny
 Jinou  často užívanou oblastí histochemie jsou  průkazy aldehydických skupin. Aldehydické skupiny  se vytvoří ve
tkáni jednak hydrolýzou DNA kyselinou  chlorovodíkovou (při provádění Feulgenovy reakce), jednak oxidací polysa-
charidů (glykogen, mukopolysacharidy, glykoproteiny) kyselinou jodistou (HIO4) (při PAS reakci - periodic acid

Schiff). Při hydrolýze DNA kyselinou chlorovodíkovou (při 60° C) je purinová báze DNA extrahována a furanový kruh
deoxyribos vytvoří aldehydické skupiny; při oxidaci polysacharidů se sousední hydroxylové skupiny nebo hydroxylová
a aminoskupina (u hexosaminu) změní rovněž na aldehydické skupiny. Tyto pak reagují s leukobazí bazického fuchsinu
(Schiffovo reagens) a vytvoří stabilní reakční produkt (červené zbarvení).