Vypracovane-otazky-ke-zkousce

docházet k výměně genů (alel)

Genetické mapování

1. lokalizace určitých genů na určitý chromozom (viz. Metody fyzické lokalizace)

2. stanovení pořadí genů na tomto chromozomu

3. stanovaní relat. vzdálenosti mezi geny stanovením vazby mezi geny, př. Tříbodový pokus

Tříbodový pokus - známe lokalizaci genu A (marker gen) na urč. chromozomu → po zjištění vazby mezi tímto genem a

dalšími usuzujeme, zda jsou další geny na stejném chr., a seřadíme je za sebou podle velikosti

rekombinačního zlomku → * chromozomová mapa (schéma - vzdálenosti mezi geny v tzv. cM)

Fyzické mapování

I) metody s nízkým stupněm rozlišení – megabase DNA (Hybridomová technika a FISH metoda)

II) metody s vysokým stupněm rozlišení – stovky kilobasí až jednotlivé nukleotidy

1. Hybridomová technika – základem genetického i fyzického mapování→ dostatečně hustá síť marker genů

v genomu!

• založena na hybridizaci bb dvou druhů (př. Člověk – myš) v tkáňové kultuře

• čl.+myš → heterokaryon → rozdělí se – synkaryon (hybrid řadou dělení postupně náhodně ztrácí chr. lidského původu → stabilizace b. → vytvoříme klonováním panel bb → na něm zjišťujeme přítomnost vhodného znaku specif. pro lidské bb → cytogeneticky zjistíme, které chr. čl. jsou přítomny (lokalizace genu na urč. chr. porovnáváním ne/přítomnosti znaku a chr. na panelu bb.)

• nové techniky používají místo normál. lidských bb uměle * mikrobb. s jedním chr.

• pro detailnější lokalizaci – vhodný zásah (př. RTG záření) → * zlomy →reparace a vestavění části chr. do hostitelského geonomu

1. FISH metoda (Fluorescence In Situ Hybridization) – pomocí hybridizace DNA

   • namnožením DNA (např. PCR) získáme potřebnou sondu (vhodně ozn.fluoreskujícím barvivem)

   • denaturace preparátu chrr. připraveného standard. cytogenetickými technikami → obarvení preparátu sondou – specificky se fixuje díky komplementaritě → lokalizace – mikroskopicky

2. Metody s vysokým stupněm rozlišení

   • snaha získat mapy jednotlivých chrr.

   • využití materiálu genetických a chromosomově specifických DNA knihoven – správně seřadit klony za sebou a sekvenování (zkoumá pořadí basí)

   • použití FISH metody na nekondenzované DNA (jádro v klidu) – tři různé sondy označené fluorochromy→ mikroskopicky vzáj. pozice barevných skvrn

   • preparát s nataženou DNA → značená sonda (DIRVISH metoda)

   • vědecký program pro mapování lidského geonomu – HUGO (Human Genom Project)

   • pouze 5% DNA má kódující fci – pro vyhledávání kód.sekvencí → metoda otevřených čtecích rámečků ORF (přítomnost stop kodonů dostatečně daleko od sebe)

   • posiční klonování – využívá informace o lokalizaci genu na urč.pozici daného chr. → pátrání po fčním genu omezeno na její okolí (→poznání struktury genu Duchenneovy svalové dystrofie nebo cystické fibrosy pankreatu)

   • etický problém???