Vypracovane-otazky-ke-zkousce

2. a dalšími cykly buněčného dělení

- spočívá v inkorporaci bromdeoxyuridinu (BrdU), analogu

thyminu, během S-fáze do nově syntetizované molekuly

DNA, tedy do sesterské chromatidy během replikce

- následně se barví Giemsou a výsledkem je bledě zbarvená

chromatida s BrdU a tmavě zbarvená chromatida původní

- pro testování mutagenních účinků chemických látek a pro

diagnostiku syndromů se zvýšenou lomivostí chromosomů

(Bloomův syndrom)

• FISH – využívá technik molekulární genetiky – specifické sondy hybridizují s denaturovanou DNA –

zvýrazněny navázanými fluorescenčními barvivy

- k rychlé detekci trisomií v prenatální diagnostice, k identifikaci struktury složitějších

přestaveb, v nádorové cytogenetice

• CGH – komparativní genomová hybridizace

- k detekci odchylek v množství genetického materiálu – počtu kopií jednotlivých úseků DNA –

mezi různými genomy

- současná hybridizace 2 rozdílně značených DNA k metafazickým chromosomům zdravého

dárce v poměru 1:1, následuje změření intenzity fluorescence obou fluorochromů podél všech

chromosomů

- oblasti zmnožení nebo ztráty DNA sekvencí jako delece, duplikace nebo amplifikace jsou pak

viditelné na základě změny zbarvení daného chromosomu

- změna barvy je způsobena změnou poměru intenzity signálů obou fluorochromů

- v oblasti zmnožení genetického materiálu bude převažovat DNA nádoru a v místě delece

kontrolní DNA

- umožňuje detekci malých delecí, delecí maskovaných translokacemi, u nádorů pak delecí

tumor-supresorových genů a amplifikací protoonkogenů

- použití v prenatální diagnostice nebalancovaných přestaveb

- možnost aplikace na nekultivované buňky a tkáně, nevyžaduje přítomnost dělících se buněk

- provádí se z izolované DNA a je dostačující malé množství buněk

- vyšetření celého genomu při jedné hybridizaci

- možnost detekovat pouze nebalancované změny a zároveň změny o velikosti 2-10Mb a větší,

což odpovídá jednotlivým podpruhům v karyotypu

- nemožnost prokázat odchylku v buněčném klonu menším než 50% - nelze takto vyšetřovat

mozaicismus

• M-FISH – použití malovacích sond na úplnou sadu chromosomů v metafázi

- pomocí kombinatoriálního značení jednotlivých chromosomů lze najednou vyšetřit celý

genom a odhalit tak většinu strukturních přestaveb, balancovaných i nebalancovaných

- způsob značení celého karyotypu pomocí kombinování 5 fluorochromů

- fluorescenční signály jsou snímány přes speciální filtry a výsledná analýza vyžaduje

počítačové zpracování – program přiřadí ke chrom.párům pseudobarvy rozlišitelné okem

• SKY – pro detekci signálů používá interferometr

• mBAND – kombinatoriální značení jednotlivých částí chromosomu získaných mikromanipulační

technikou → pseudopruhovaný chromosom, na kterém je možné relativně přesně určit