Vypracovane-otazky-ke-zkousce

• většina mutací negativně ovlivňuje zdravotní stav člověka a mutagenní látky jsou zpravidla i teratogenní a kancerogenní  proto je testování mutagenního účinku látek standardní součástí povinných atestů před jejich uvedením do praxe  Amesův test  umožňuje odhalit nejen mutagenní aktivitu, ale testovat i typ vyvolávaných mutací a odhalit i potenciální mutageny; byl vytvořen speciální auxotrofní kmen Salmonela typhimurium  tento kmen roste na mediu s přídavkem histidinu; testované látky jsou přidávány média Amesův test hodnotí vznik zpětných mutací po přenesení na minimální medium; přidáním malého množství histidinu do minimálního media v další fázi testu umožňuje omezený počet dělení bakterií a testuje i látky mutagenní pouze v průběhu replikace; přidáním extraktu jaterních enzymů do media stimuluje metabolické změny testovaných látek v organismu a odhaluje i mutagenicitu, která se projeví teprve až po těchto změnách

• současná široká škála metod testuje jak mutagenní účinky, tak genotoxicitu  komplexní zajišťování genotoxicity je zajišťováno na 3 úrovních

1. monitorování prostředí

2. monitorování biologických účinků  informace o odpovědi lidského organismu na působení genotoxických látek, o expozici i účinnosti preventivních opatření

3. monitorování genetické – epidemiologické studie výskytu spontánních potratů, vrozených vývojových vad ve vztahu ke genotoxickým látkám

54. REPARAČNÍ MECHANISMY ORGANISMU A JEJICH GENETICKÁ KONTROLA

• reparační mechanismy vznikaly v průběhu evoluce souběžně se složitou strukturou buněk  zajišťují přesnost replikace, opravují mutace; jsou selekčně výhodné

1. Fotoreaktivace – významně se uplatňuje u bakterií; ozáření UV-zářením vytváří v jejich DNA dimery thyminu 

enzym DNA-fotolyasa se váže k dimerlm thyminu jeho štěpící aktivita je závislá na energii

viditelného záření zejm. modré části spektra  po ozáření rozštěpí dimery  ve tmě se enzym

naváže na DNA v místě dimeru thyminu, ale dimery neštěpí

- u mnohobuněčných organismů se fotoreaktivace může uplatňovat jen v povrchové vrstvě buněk

1. Excizní opravy

   • jsou důležitou součástí replikace  při vysoké rychlosti zařazování nukleotidů do nového řetězce je frekvence chybného zařazení bazí poměrně vysoká  první kontrolou (scanning) správnosti párování bazí v nově syntetizovaném řetězci DNA a v matrici zajišťuje polypeptid, který je součástí komplexu DNA-polymerasy III

   • reparace probíhá ve střech krocích:

     1. DNA endonukleasa rozpozná chybně zařazené baze, naváže se a přeruší řetězec DNA; svojí funkcí endonukleasy pak chybné sekvence vyštěpí

     2. DNA polymerasa I využije 3´- OH opravovaného řetězce a podle původního řetězce doplní do mezery sekvenci nukleotidů

     3. DNA ligasa spojí nově syntetizovaný úsek s pokračováním opravovaného řetězce