Vypracovane-otazky-ke-zkousce

Typy genové terapie:

1. Somatická genová terapie (somatic gene therapy)  opravuje geny pacienta, aniž by došlo k

dědičnému předávání opravených genů na další generace

1. Zárodečná genová terapie (germline gene therapy)  měnila by geny už v zárodečných buňkách

(spermie, vajíčko) a změna genu by byla přenosná na

další generace.Tento typ terapie zatím není povolen.

Strategie genové terapie:

1. Přímá genová terapie

• oprava chyby, tzn. změny sekvence DNA, která je odpovědná za maligní transformaci  př. odstranění mutace v protoonkogenu nebo vnesení chybějících tumorsupresorových genů

• nelze opravit všechny buňky, protože genotyp má multifaktoriální charakter

  1. Nepřímá genová terapie

• vnesení nové genetické informace do buňky (nádorové nebo jiného typu), která vede k likvidaci nádorových buněk  př. vnesení sekvencí DNA, které kódují např. stimulaci antitumorové imunitní odpovědi nebo mění nádorovou angiogenesu a nebo aktivují neaktivní molekulu antimetabolitu k její cytotoxické aktivitě

• přísná etická kritéria  výběr pacientů, je zvažována bezpečnost zákroku jak pro pacienta, tak pro ošetřující personál, účelnost terapie

• vlastní genová manipulace  ex vivo  techniky pro vnesení genu do lidských buněk založeny na:

  1. Fyzikální metody

• umožňují přímě vpravení nukleové kyseliny do cílových buněk  mikroinjekce, mikroprojektily nebo zavedení slabého el.proudu k buněčné suspenzi za přítomnosti genu, který má být do buňky inkorporován

• účinnost < 1%

  1. Chemické metody

• využívají pro inkorporaci genů do buněk např. fosforečnan vápenatý, liposomy  zlepšují průchod přes buněčnou membránu

  1. Biologické metody

• využit virů jako vektorů DNA  nejč. DNA viry (papovaviry, adenoviry, herpes simplex virus) a retroviry

• účinnost přenosu požadované sekvence – téměř 100%

• další vektory: plazmidy – obsahují multiplikované kopie vybraného genu  jsou injikovány do krevního řečiště nebo přímo do oblasti nádorového bujení

monoklonální protilátky

• in vitro pomnožené tumor infiltrující lymfocyty (TIL)

• Př. TIL po i.v. podání  selektivně infiltrují pooperační rezidua nádoru, ze kterého byly izolovány. Ex vivo může být do genomu TIL integrován např. gen pro TNF. Gen TNF (je součástí genomu TIL) je přepisován a syntetizovaný protein je secernován přímo do nádorové tkáně, kterou nekrotickým procesem likviduje  geneticky řízení zvýšení imunobiologické aktivity

• Př. retrovirus  nejprve je in vitro geneticky modifikován; sekvence kódující virové proteiny jsou odstraněny a ponechány jsou pouze sekvence kontrolující jejich expresi (LTR)  následuje vystřižení sekvencí kódujících tvorbu produktu zvoleného pro příslušnou genovou terapii  tyto rekombinantní retroviry mají schopnost infikovat buňky a začlenit do jejich genomu exogenní geny, ale nemohou se replikovat  příkladem genové terapie tohoto typu je léčba maligního gliomu = nádor s vysokou mitotickou aktivitou, nemetastazuje a je obklopen nervovou tkání, která se nereplikuje

• př. Herpes simplex virus (HSV) jeho gen pro enzym thymidinkinasu byl integrován do genomu cílové buňky, a v ní přeměňuje jinak neaktivní lékovou formu (prodrug) v aktivní látku s cytostatickým účinkem